İnek oositlerinin in-vitro olgunlaştırılmasında farklı vasatların etkileri

Abstract

ÖZET Bu çalışma inek oositlerinin in-vitro olgunlaştınimasında (maturasyonunda) farklı vasatlar içine değişik maddelerin katılmasının etkilerini ortaya koymak için yapılmıştır. Kullanılan vasatlar; Tissue Culture Medium - 199 (TCM-199), Ham's F-10 ve Minimum Essential Medium (MEM), katkı maddeleri ise; Estrus Cow Serum (ECS), Fetal Calph Serum (FCS) ve Hormon Kombinasyon (FSH, LH, Estradiol 17(3)' larıdır. Üç çalışma grubu oluşturuldu ve her grup dört alt gruba ayrıldı. Grup A : 1 TCM-199 + %20 ECS, 2.TCM-199 + %20 FCS, 3.TCM-199 + Hormonlar, 4.TCM-199 (Kontrol). Grup B : 1. Ham's F-10 + %20 ECS, 2Ham's F-10 + %20FCS, 3Ham's F-10 + Hormonlar, 4.Ham's F-10 (Kontrol). Grup C : l.MEM + %20 ECS, 2.MEM + %20 FCS, 3. MEM + Hormonlar, 4.MEM (Kontrol). İnek oositleri mezbahadan kesim sonrası toplanan inek ovaryumlanndan elde edilerek, IVM için kumulus ile sarılı olanlar seçildiler. Hazırlanan kültür vasatlarına konularak, %5 CO2 ve maximum nemli hava içeren etüvde, 39°C'de, 24 saat süreyle inkubasyona bırakıldılar. Yapılan bu çalışmada toplam 1116 COC (Cumulus Oosit Complex) kullanıldı. Kültür sonucunda, oositler mature olup olmadıklarının tespiti amacıyla, pastör pipetleriyle mekanik olarak kumulus hücrelerinden soyuldular, %1'lik aseto-orseinle boyamadan önce asetik alkolde fixe edildiler. Daha sonra boyanan oositler faz-kontrast mikroskopta muayene edildiler. Boyanan oositlerde maturasyon kriteri olarak 1. polar hücresi ve Mü'ye ulaşan yumurta hücresinin kromozoma! yapısının tespiti yapıldı.Her gruptaki maturasyon sayılan ve yüzde oranlan sırasıyla : Grup A ; 87/124 (%70.16), 65/91 (%71.48), 58/81 (%71.60), 13/85 (%15.30), Grup B ; 67/92 (%72.82), 60/93 (%64.51), 63/91 (%69.23), 21/52 (%40.38), Grup C ; 73/113 (%64.60), 72/95 (%75.78), 76/105 (%72.38), 42/94 (%44.68) olmuştur. Buaraşurma sonuçlarına göre, kültür vasatına katılan serumlar ve hormonlar kontrol gruplarına karşılık IVM yüzde oranlarım istatistiki açıdan önemli oranda artırmışlardır (P<0.001). Bulguların istatistiki analizleri Chi-square test yöntemine göre yapılmıştır. Anahtar Kelimeler: İnek, Oosit, İn- vitro Maturasyon

SUMMARY Effects of Different Medium and Supplements In-Vitro Maturation of Bovine Oocytes. This work is designed to evaluate the influence of different types media and supplements in-vitro maturation (TVM) of preovulatory oocytes in bovine. We studied, three different media (TCM-199, Ham's F-10 and MEM) and three different supplements; serum from estrous cattle (ECS), serum from fetal calves (FCS) and hormones (FSH, LH, Estradiol 170)). We assigned three experiment groups. These are ; Group A : l.TCM-199 + %20 ECS, 2.TCM-199 + %20 FCS, 3.TCM-199 + Hormones, 4.TCM-199 (Control), Group B : 1 Ham's F-10 + %20 ECS, 2Ham's F-10 + %20 FCS, 3.Ham's F-10 + Hormones, 4,Ham's F-10 (Control), Group C : l.MEM + %20 ECS, 2.MEM + %20 FCS, 3. MEM + Hormones, 4.MEM (Control). Preovulator bovine oocytes recovered from ovaries of slaughtered cows and cumulus-oocyte complexs (COC) selected for IYM, were cultured in maturation medium for 24 h at 39°C and a moist atmosphere 5% CO2. Total 1116 COC examined. After pipetting to remove the cumulus cells, denuded oocytes were fixed in acetic alcohol and then stained with 1% aceto-orcein and examined with a phase-contrast microscop (x40 magnification) for evaluation of maturation. Oocyte maturation was evidenced by presence of first polar bodies and metaphaze II chromosome configurations in stained eggs. The maturation rates wasrecorded as the total number of examined oocytes. Proportions (percentage) of matured oocytes: Group A ; 87/124 (%70.16), 65/91 (%71.48), 58/81 (%71.60), 13/85 (%15.30), Group B ; 67/92 (%72.82), 60/93 (%64.51), 63/91 (%69.23), 21/52 (%40.38), Group C ; 73/113 (%64.60), 72/95 (%75.78), 76/105 (%72.38), 42/94 (%44.68) respectively. This results showed that percentage of maturation was higher than controls when serums and hormones were added culture mediums. Statistical evaluation of the differences between the work groups was carried out by the chi-square test. Key Words: Bovine, Oocytes, In-vitro Maturation