SW1353, HEP3B ve HT-29 kanser hücre hatlarında ADAMTS9 gen ekspresyon analizi ve IL-23, IL-33, IL-6, IL-17F, IL-1 alfa sitokinleriyle uyarılma mekanizması

Abstract

Amaç: Bu çalışmada kondrosarkom, karaciğer kanseri ve kolorektal kansere aithücre hatlarında ADAMTS9 gen ekspresyonunun bazı sitokinlerce 2, 6 ve 24.saatlerde olan değişimleri araştırılmıştır.Materyal-metod: Kondrosarkom (SW1353), karaciğer kanseri (HEP3B) ve kolonkanseri (HT-29) hücreleri IL-23, IL-33, IL-6, IL-17F ve IL-1alfa ile 2, 6 ve 24 saatmuamele edildi. Trizolle RNA izolasyonu yapıldıktan sonra komplementer DNA?larelde edildi. ADAMTS9 ve ß-Aktin çalışma sıcaklığını tespit etmek için gradient PCRyapıldı. Real-time PCR standartları için ADAMTS9 ve ß-Aktin PCRı kuruldu ve jelekstraksiyonu yapıldı. Elde ettiğimiz DNA belirli oranlarda dilüe edildi. Uygunçalışma programında ADAMTS9 ve ß-Aktin real-time PCR?ları yapıldı.Bulgular: HEP3B hücre hattında IL-23 ve IL-33, ADAMTS9 ekspresyonunu sürebağımlı olarak istatistiksel olarak önemli oranda etkiledi (sırasıyla p=0.031 vep=0.015). 6 saatlik IL-23 maruziyeti altında saptanan ADAMTS9 ekspresyonu, 2saatlik maruziyete göre yüksek bulundu (p=0.029). 24 saatteki değeri ise 6 saatdeğerine göre önemli oranda düşüktü (p=0.029). IL-33 maruziyeti altında 24. saattekiADAMTS9 ekspresyonu, hem 2 hem de 6 saatteki değerlerden düşük bulundu(p=0.029). HT29 hücre hattında ADAMTS9 ekspresyonu zamanla hiçbir sitokinmaruziyeti altında önemli olarak artmadı. SW 1353 hücre hattında IL-6 maruziyetialtındaki 24. saat ADAMTS9 ekspresyonu, kontrol ve 6. saat değerine göreistatistiksel olarak düşük bulundu (p=0.029). Benzer şekilde kontrol grubundakiADAMTS9 değeri, hem 2 saat hem de 24 saat IL-17F maruziyeti değerine göresınırda bir önem düzeyinde yüksek bulundu (p=0.057).Sonuç: Karaciğer kanser hücrelerinde uzun dönemde düşük bulunan ADAMTS9ekspresyonunun, IL-23 ve IL-33 maruziyeti ile kısa dönemde artmış olarakbulunması; kondrosarkomda ise IL-6 ve IL-17F ile ADAMTS9 ekspresyonununsadece 6 saatlik dönemde artması, böylece tümöral dokuda düşük ekspresyondasaptanması beklenen ADAMTS9 düzeylerinin zaman bağımlı olarak sitokinlerceartırılması karşılıklı etkileşimlerin varlığını düşündürmekte ve daha ileri çalışmalarlaortaya konulması gerekmektedir.

Aim: The changes in ADAMTS9 gene expression in SW1353, HEP3B VE HT-29cell lines with various cytokines at 2, 6 and 24 hours were investigated.Material and Methods: Condrosarcoma (SW1353), hepatic (HEP3B) and colorectalcancer (HT-29) cell lines were treated with IL-23, IL-33, IL-6, IL-17F ve IL-1alphafor about 2, 6 and 24 hours. Following RNA isolation with Trizol, complemantaryDNAs were obtained, and gradient PCR was performed for determination of ß-Actinstudy temperature. ADAMTS9 and ß-Actin PCR were established and gel extractionwas done for real-time PCR standarts. DNA obtained was diluted with a certainproportions. ADAMTS9 and ß-Actin real-time PCR were performed under theappropriate study program.Results: IL-23 ve IL-33 in the HEP3B cell line significantly affected ADAMTS9expression in a time dependent manner (p=0.031 and p=0.015, respectively).ADAMTS9 expression found under 6-hour IL-23 exposure was significantly higherthan under 2-hour (p=0.029). The 24-hour value was significantly lower than the 6-hour value (p=0.029). ADAMTS9 expression under IL-33 exposure at 24th hour wasfound as lower than the values at 2nd and 6th hour (p=0.029). ADAMTS9 expressionin HT29 cell line did not significantly increased under cytokines herein during timeperiod. 24-hour ADAMTS9 expression in SW1353 line under IL-6 exposure wasstatistically lower when compared to 6-hour value (p=0.029). Similarly ADAMTS9value in control group was nearly higher than the values under 2- and 24-hour IL-17F exposure (p=0.057).Conclusion: ADAMTS9 expression found as lower in hepatic cancer cells in longtime period was increased under IL-23 and IL-33 exposure in short time period;ADAMTS9 expression with IL-6 and IL-17F was increased in only 6-hour period inchondrocarcinoma. Consequently increased ADAMTS9 expression, which would beexpected as decreased in tumoral tissue otherwise, with cytokines as time dependentcan be based on reciprocal interaction and therefore further studies should be done.