Baş-boyun kanserlerinde, ıng1 splicing varyantlarının (p24ING1 ve p33ING1) karsinogenez ve metastazdaki rollerinin incelenmesi

Abstract

Bu tezin amacı, Baş ve Boyun Skuamöz Hücreli Karsinomda (HNSCC), tümor baskılayıcı genlerden, Inhibitor of Growth (ING) gen ailesinin bir elemanı olan ING1 genine ait iki farklı varyantın (p33ING1 ve p24ING1) etkinliğini araştırmaktır. Bu amaçla, HNSCC ye ait primer (74A) ve metastatik (74B) iki farklı hücre hattında, rekombinant DNA teknolojisi ile elde edilen varyantlar transfekte edilerek gen ifadelerinin oluşması sağlanmıştır. Oluşan gen ifadelerinin, hücreler üzerindeki etkinliği, xCELLigence sistemi ve yara deneyleri ile gerçek zamanlı olarak ölçülmüş, kontrol grupları ile karşılaştırılarak değerlendirilmiştir.Kontrol grupları ile yapılan kıyaslamalar sonucunda p33ING1 varyantının primer tümörlü hücre hatlarında proliferasyonu %88,7 oranında, metastatik hücre hatlarında proliferasyonu %92 oranında azalttığı, p24ING1 varyantının ise primer tümörlü hücre hatlarında proliferasyonu %83.4 oranında, metastatik hücre hatlarında proliferasyonu %84.1 oranında azalttığı tespit edilmiştir. Bu hücre hatlarının migrasyon kabiliyetleri incelendiğinde ise, %54 oranında azalma olduğu görülmüştür. ING gen ailesinin hücre içi mekanizmalarda rol aldığı ve tümör baskılayıcı diğer genler ile ortak veya onlardan bağımsız olarak hücre proliferasyonunu etkilediği düşünülmektedir. Literatürde ING1 varyantlarının, özellikle p24ING1 varyantının, HNSCC de proliferasyon ve migrasyondaki rolüne ait veriler kısıtlı olmasına karşın, bu çalışma ile, ING1 genine ait iki varyantın primer ve metastatik kanser hücre hatları üzerindeki anti-proliferatif etkisi gösterilmiş, potansiyel bir terapötik ajan olabileceği düşünülmüştür.*Bu çalışma TÜBİTAK (Proje No: 110S424) tarafından desteklenmiştir.Anahtar Sözcükler 1. KANSER 2. HNSCC, 3. ING1, 4. Rekombinant DNATeknolojisi, 5. Bioteknoloji

The aim of this thesis is to reveal the activity of two splicing variants (p33ING1 and p24ING1) of ING1 gene, which is the member of Inhibitor of Growth (ING) gene family, in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma (HNSCC). For this purpose, variants that obtained by recombinant DNA technology, transfected into primer (74A) and metastatic (74B) cell lines which belongs to HNSCC and gene expression is provided. The effects of gene expressions on cell lines quantified in real time by xCELLigence system and observed by wound healing experiments. Results were evaluated in comparison with control groups.As a result of the comparisons with the control groups, p33ING1 variant reduces proliferation by 88.7% in primer cell line and reduces proliferation by 92% in its metastatic cell line. Besides, it is revealed that p24ING1 variant reduces proliferation by 83.4% in primer cell line and reduces proliferation by 84.1% in its metastatic cell line. When the migration ability of these cell lines examined, was found to decrease by 54%. ING gene family is thought to be involved in the intracellular mechanisms and affect cell proliferation by collaborating with other tumor suppressor genes or independently way. Although, in the literature, the data about the role of ING1 variants (especially p24ING1) in the proliferation and migration on HNSCC is limited, this study revealed anti-proliferative affects of two splicing variants of ING1 gene, on primary and metastatic HNSCC cell lines and is thought to be a potential therapeutic agent.*This study was supported by TÜBİTAK (Project Number: 110S424)Key Words 1. CANCER 2. HNSCC, 3. ING1, 4. Recombinant DNA Technology,5. Biotechnology