Endüstriyel kullanım amaçlı A. niger βeta glukanaz enzimininE. coli `de üretilmesi, saflaştırılması ve karakterizasyonu

Abstract

β - glukanaz enziminin yem endüstrisinde aktif olarak kullanılmasının sağlanması ile hayvanların yemden elde edecekleri verimlilik daha yüksek bir seviyeye ulaşacaktır. β - glukanaz eldesi ile elde edilen yemden tüketen hayvanlardan elde edilecek olan verimde doğru orantılı olarak artacaktır. Ülkemizde hayvancılık faaliyetinin ekonomik açıdan büyük bir öneme sahip olması bu enzimin üretilme fikrinin ortaya çıkmasında büyük bir paya sahiptir. Bu çalışmayla β - glukanaz enzimini kodlayan nükleotid dizisi Escherichia coli için kodon optimizasyonu gerçekleştirilerek pTOLT ve pET22b vektör sistemine klonlanmıştır. Elde edilen rekombinant vektörlerle Origami hücreleri transforme edilmiş ve proteinin üretilmesi işlemi gerçekleştirilmiştir. Protein afinite kromatografisiyle saflaştırılmış ve saflaştırılan enzimin aktif olarak çalıştığı yapılan aktivite testi sonucu anlaşılmıştır. Sonuç olarak saf ürün halinde elde edilen β – glukanaz enzimi ticari olarak kullanılabilir niteliktedir ve yem endüstrisinde kullanılarak verimliliği arttırıcı özelliğinden faydalanılabilir.

The efficient use of β - glucanase in the feed industry will lead to a higher level of animal feed efficiency. It has been reported that after the addition of β - glucanase enzyme to the animal feed, the yield of the products to be obtained from these animals will increase proportionally. Due to the economic importance of the livestock sector in our country, β - glucanase has a great role in the idea of producing recombinant DNA technology. In this study, codon optimization was performed for the nucleotide sequence encoding β - glucanase enzyme (E.coli) to be produced in the bacterial expression system and cloning was performed on pTOLT and pET22b vector systems. Recombinant plasmids (pTOLT-β-glucanase and pET22b-β-glucanase) were transformed into Origami cells and protein was produced. Quantitative analysis of the recombinant enzyme was performed and the activity test of the purified enzyme was found to be active. As a result, β - glucanase enzyme obtained as pure product has been found to be commercially available and it can be benefited from its efficiency increasing feature in the feed industry.