Sığırlardan toplanan kenelerde lyme hastalığının etkeni borrelia burgdorferi (sensu lato) varlığının moleküler tanı yöntemleriyle belirlenmesi

Abstract

Amaç: Bu çalışmada, Samsun ve Ordu illerinde yetiştirilen sığırlardan toplanan Ixodesricinus türü kenelerde Lyme hastalığı etkeni Borrelia burgdorferi sensu lato kompleksitürlerinin 16S rDNA ve flaB genlerine dayalı PZR yöntemi ile belirlenmesi hedeflendi.Materyal ve Metot: Çalışmada, Samsun ve Ordu illerinde yetiştirilen sığırlara tutunankeneler toplandı ve tanımlandı. I. ricinus türü kenelerin genomik DNA'ları elde edildi. KeneDNA'larında 16S rDNA ve flaB genleri PZR yöntemiyle çoğaltıldı. Borrelia burgdorferisensu lato kompleksi dahilinde, B. burgdorferi, B. afzelii ve B. garinii türleri referanssuşlarına ait DNA'lar pozitif kontrol olarak kullanıldı. PZR koşulları optimize edildi ve PZRürünlerini saptama limiti belirlendi. DNA örneklerinin PZR ürünlerine ait bantlar yatayelektroforezde referans suşlar ve DNA marker'ler ile karşılaştırmalı olarak tanımlandı.Sonuçları doğrulamak amacıyla, flaB geni pozitif bulunan PZR ürünlerine dizi analiziyaptırıldı.Bulgular: Bu çalışmada toplanan 369 kenenin 289'unun (%78) I. ricinus türüne ait olduğusaptandı. Kene DNA örneklerinin flaB ve 16S rDNA genlerini hedefleyen PZR ile analizlerisonucunda, Borrelia referans suşlarıyla karşılaştırmalı olarak yatay elektroforezde sırasıyla150 bç ve 1360 bç civarında bant oluşturan örnekler pozitif olarak değerlendirildi. I. ricinustürü kenelerde Borrelia prevalansı flaB geni ile %17,24, 16S rDNA ile %15,51 oranlarındasaptandı. flaB genine ait DNA dizi analizi sonuçları homoloji yönünden karşılaştırıldı veyalnızca B. burgdorferi sensu lato'ya ait türlerle %87-95 oranında benzerlik gösterdiğibelirlendi.Sonuç: Samsun ve Ordu illerinde yaygın olduğu saptanan I. ricinus türü kenelerde B.burgdorferi sensu lato varlığı, flaB ve 16S rDNA genlerine dayalı PZR ile belirlendi. Bubölgede, Ixodes cinsi kenelerin Lyme hastalığı etkenini taşıdıklarının belirlenmesi, halksağlığı ve hayvan sağlığı yönünden önemli bir risk faktörünü oluşturmaktadır.Anahtar Kelimeler: Borrelia; Lyme; Ixodes; flaB; 16S rDNA; PZR

Aim: The aim of this study was to determine the Borrelia species within Borrelia burgdorferisensu lato complex, causative agent of Lyme disease, from Ixodes ricinus ticks collected fromcattle in various parts of Samsun and Ordu provinces.Material and Method: In this study, ticks were collected from cattle reared in Samsun andOrdu and the tick species were identified. Genomic DNA from I. ricinus were obtained. 16SrDNA and flaB genes from tick DNA's were amplified using PCR. DNA's from referencestrains of B. burgdorferi, B. afzelii and B. garinii were used as positive control. PCR wasoptimized and limit of detection in PCR was detected. Electrophoresis bands that belong toPCR products of the sample DNA's were identified in comparison with the reference DNA'sand the DNA Ladders. DNA sequencing was done for flaB gene-based PCR products so as toconfirm the results.Results: 289 out of 369 ticks (78%) collected in this study were identified as I. ricinus. As aresult of flaB and16S rDNA based PCR analysis of tick DNA samples, the samples with thesizes of 150 bp and 1360 bp electrophoresis bands respectively were determined as positive incomparison with Borrelia reference strains. Borrelia prevalence in I. ricinus ticks based onflaB and 16S rDNA genes were detected as 17,24 % and 15,51% respectively. Homologycomparison of DNA sequences for flaB gene was done and high similarity with only B.burgdorferi sensu lato species was determined.Conclusion: B. burgdorferi sensu lato was detected in I. ricinus ticks that are prevalent inSamsun and Ordu by using PCR targeting flaB and 16S rDNA genes. Determination of thecausative agent of Lyme disease in Ixodes species in this region is an important risk factor forhuman and animal health.Keywords: Borrelia; Ixodes; Lyme; flaB; 16S rDNA; PCR