Sığır mastitis kökenli streptokok izolatlarının bazı virülens özelliklerinin belirlenmesi

Abstract

ÖZET SIĞIR MASTİTİS KÖKENLİ STREPTOKOK İZOLATLARININ BAZI VİRÜLENS ÖZELLİKLERİNİN BELİRLENMESİ Amaç: Bu çalışmada sığır mastitislerinden izole edilen Streptokok türlerinin fenotipik ve genotipik identifikasyonları gerçekleştirildikten sonra, suşların sahip oldukları bazı önemli virülens faktörlerini ortaya koymak, antibiyotiklere direnç profillerini belirlemek ve ayrıca gerçekleştirilecek moleküler tiplendirme yöntemi ile suşlar arasındaki genetik ilişkinin belirlenmesi amaçlanmıştır. Materyal ve Metot: Çalışmada 22 adet Streptokok izolatı incelendi. İzolatlar konvansiyonel fenotipik testler ile ayrıca PCR ile genotipik olarak identifiye edildi. Suşları virülens özelliklerinden biyofilm oluşturma ve jelatinaz aktiviteleri fenotipik olarak belirlenirken, diğer bazı virülens özelliklerini kodlayan hylB,fnbB, scpB, sbl,sip,pau ve lmb genleri varlığı araştırıldı. Suşların 12 farklı antibiyotiğe karşı duyarlılık profilleri incelenerek çoklu direnç durumları ortaya konuldu. Samsun İli ve civarından izole edilmiş RAPD-PCR ile genotiplendirildi ve suşlar arasındaki genetik ilişki değerlendirildi. BULGULAR: İzolatlardan 16'sı S .dysgalactiae, 1'i S.agalactiae ve 5'i S.uberis olarak hem fenotipik hem de genotipik olarak identifiye edildi. S.agalactiae suşu biyofilm üretimi yönünden pozitif ancak jelatinaz negatif bulunurken , S.dysgalactiae suşlarında biyofilm üretimi ve jelatinaz pozitiflik oranları sırasıyla %62,5 ve %75 , S.uberis suşlarında sırasıyla %80 ve %60 bulundu. Suşların hiçbirinde hylB,spbl,sip ve lmb geni bulunamazken, S.agalactiae suşunda cfb geni belirlendi. S.dysgalactiae suşlarının 14'ünde (%87,5) ve 6'sında (37,5) sadece sırasıyla mig ve fnbB genleri bulunurken S.uberis suşlarının 4'ünde (%80) skc ve 2'sinde (%40) pau geni bulundu. RAPD tiplendirmesi sonunda S.dycgalactiae 3 küme ve 5 benzersiz tipe, S.uberis suşlarının ise 1 küme ve 3 benzersiz tipe ayrıldığı görüldü. Suşların tümünde en az 2 antibiyotiğe karşı direnç bulunurken çoklu antibiyotik direnci %81,8 oranında tespit edildi. Sonuç: Mastitis izolatı streptokok türlerinin çeşitli virülens özellikleri yönünden fenotipik ve genotipik olarak varyasyonlar göstermesinden ve büyük ölçüde çoklu antibiyotik direnci belirlenmesinden dolayı, mastitis kontrolüne yönelik programlarda daha ayrıntılı karakterizasyon çalışmalarına yer verilmesi ve akılcı tedavi stratejilerinin geliştirilmesi gerektiği kanısına varıldı. Anahtar Kelimeler: Mastitis; Virülens özellikleri; Genotiplendirme; Antibiyotik duyarlılığı Aşur KURT Yüksek Lisans Tezi Ondokuz Mayıs Üniversitesi- Samsun,Temmuz-2018

ABSTRACT DETERMINATION OF SOME VIRULENS PROPERTIES OF STREPTOCOCCUS ISOLATES ORIGINATED FROM BOVINE MASTITIS Aim: In this study, after phenotypic and genotypic identification of streptococcus species previously isolated from bovine mastitis, determination of some important virulence factors and antibiotic resistance profiles of the strains, and the genetic relationship between strains by molecular typing methode. Material and Method: Twenty-two streptococcus isolates were identified by conventional phnotypic tests and also genotypically by PCR. Wile two of the virulence properties of the strains, biyofilm production and gelatinase activity, were determined by phnotypically, the presence of th genes encoding some other virulence factors such as hylB, fnbB, scpB, spbl, sip, pau and lmb were investigated susceptibilitiy profiles of strains against 12 different antibiotics were examined and multiple resistance cases were revealed. The strains isolated from Samsun province and its vicinitiy were genotyped by RAPD-PCR and the genetic relationship between the strains wase valuated. Results: Of te isolates, 16 were identified as S. dysgalactiae, 1 as S. agalactiae, 5 as S. uberis, both phnotypically and genotypically. While S. agalactiae strains were positive for biyofilm production but gelatinase was negative, biofilm production and gelatinase positivitiy rates in S. dysgalactiae strains were found 62.5% and 75% respectively and in S. uberis strains they were 80% and 60%, respectively. The cfb gene was identified in the S.agalactiae strain while none of the strains were found to have the hylbB,spbl,sip and lmb genes. Only mig and fnbB genes were found in 14 (87.5%) and 6 (37.5%) os S.dysgalactiae strains, respectively, while 4(80%) and 2(40%) of S.uberis satrains had skc and pau genes, respectively. RAPD typing revealed that S. dysgalactiae strain were divided into 3 cluster 5 unique types, S. uberis strains were divided into one cluster and 3 unique types. Resistance to at least 2 antibiotics was found in all strans, while multiple antibiotic resistance was detectedin 81.8% Conclusion: Since streptococci isolates from mastitis have phenotypic and genotypic variations for their various virulance properties and because of the large extent of multiple antibiotic resistance determinations, it is concluded that more detailed characterization studies should be included inprograms for mastitis control and rational treatment strategies should be developed. Key words: Mastitis; Virulence properties; Genotyping; Antibiotic susceptibilitiy Aşur KURT Master Thesis Ondokuz Mayıs University-Samsun, July-2018