Trombosit hücre membranına annexın v bağlanmasının piezoelektrik algılayıcılar ile ölçülmesi

Abstract

Trombositler hemostazın sağlanmasında görev alan kan hücreleridir. Trombositler endotel dışına çıktığında ya da yabancı bir yüzeyle etkileştiğinde pıhtılaşma kaskadı devreye girer. Trombositlerin agregasyona uğramadan önceki formları oldukça önemli olup, apoptosis öncesi hakkında bilgi vermesi teşhis ve tedavi süreçlerini dolayısı ile hastanın hayatını doğrudan etkilemektedir. Bu amaçla erken trombosit apoptosisi tespiti hayati öneme sahiptir. Bu çalışmanın amacı, trombosit aktivasyonu ve erken trombosit apoptosisini hassas, hızlı ve ucuz olarak ölçebilen bir sistem geliştirmektir. Bu amaçla piezoelektrik kristallerin yüzey temizliği, hidrofilik yüzey eldesi işlemlerinin ardından sistamin ve glutaraldehit immobilizasyonu yapılarak uzatma kolu oluşturulmuştur. Erken trombosit apoptosisi tanıyıcı molekülü olan Annexin V immobilizasyonu sonrası farklı trombosit sayısı içeren kan derişimlerinde deneyler yapılmıştır. Farklı derişimler Annexin V biyosensörleri ve farklı derişimlerdeki kan süspansiyonlarındaki frekans değişimi Annexin V konsantrasyonu ve trombosit sayısıyla orantılıdır. Bu sonuç AFM ve SEM görüntüleriyle de desteklenmiştir. Geliştirilen piezoelektrik biyosensörle mevcut sistemlere göre hızlı, hassas ve ucuz bir sistemdir.

Platelets are blood cells that ensure hemostasis. When platelets get out of endothelium or get in interaction with another surface the coagulation cascade steps in. Form of platelets just before they expose to aggregation are so critical and they provide information on pre-apoptosis situation, which directly affects the diagnosis and treatment processes and thus the life of patient. Therefore, detection of early platelet apoptosis is of vital importance. The aim of this study is to develop a system which is capable of measuring the early platelet apoptosis and platelet activation in an accurate, fast and economic manner. To that end, after surface cleaning of piezoelectric crystals and obtaining a hydrophilic surface an extension arm was developed by sistamine and glutaraldehide immobilization. After immobilization of Annexin V which is responsible for detection of early platelet apoptosis several tests were conducted with blood concentrations with different platelet numbers. The said different concentrations are proportional to the Annexin V biosensors and the change in frequency at blood suspensions with different concentrations to the Annexin V concentration and the number of platelets; which results were also supported with AFM and SEM images. The piezoelectric biosensors newly developed provide a more accurate, economic and faster system in comparison with the existing systems.