N-asetil sistein`in eritrositlerde xenobiotiklerle konjugasyonunun ve transportunun araştırılması

Abstract

ÖZET N-ASETİL-L-SİSTEİN'İN ERİTROSİTLERDE XENOBİOTİKLERLE KONJUGASYONUNUN VE TRANSPORTUNUN ARAŞTIRILMASI Glutatyon, eritrositlerde detoksifikasyon işleminde rol oynayan önemli bir tiyol içeren bileşiktir. Tiyol grubu, glutatyon S-transferaz ile katalizlenen konjugat formunda xenobiotiklerin bir kısmıyla reaksiyona girer. Oluşan bu ürün ATP'ye bağımlı bir transport mekanizması tarafından eritrositlerden dışarı bırakılır. l-kloro-2,4-dinitrobenzen ve glutatyon konjugatının transportu tamamen deneysel bir sistemde çalışılmıştır. Biz, serbest-SH içeren N-asetil-L-sisteinin eritrositlerde detoksifikasyon işleminde glutatyonun yerini alıp alamayacağını inceledik. Sonuçlarımız N-asetil-L-sisteinin, l-kloro-2,4-dinitrobenzen ve N-etilmaleimid tarafından tüketilen hücre içi serbest -SH içeriğini yeniden düzenlediğini göstermiştir. NAC (10 mM), N-etilmaleimid ile muamele edilen eritrositlerde 10 dakika içinde eritrosit içi serbest-SH düzeyini 14 ± 1 umol/ml eritrosite yükseltmiştir. Kontrol düzeyi, 5 ± 0.1 umol/ml eritrosittir. Sonuçlar, NAC'nin L-BSO varlığında ve yokluğunda, eritrositlerde l-kloro-2,4- dinitrobenzen detoksifikasyon işlemini anlamlı bir şekilde yeniden kazandırdığını göstermiştir. NAC muameleli eritrositler ve önceden tüketilmiş glutatyonda transport oram 449 ±38 nmol/ml eritrosittir. NAC yokluğunda transport oranı 214 ± 21 nmol/ml eritrosittir ki kontrol ile benzeşmektedir. Sonuçlarımız NAC'nin dinitrofenol-glutatyon transportunu eski haline getirdiği ve de önceden tüketilen eritrosit glutatyonunda 1- kloro-2,4-dinitrobenzenin detoksifikasyonunda glutatyonun yerine geçtiğini ortaya koymuştur. 2003, 62 Sayfa Anahtar Kelimeler: Glutatyon, Glutatyon konjugatlan, Eritrosit, Xenobiotikler, NAC, Oksidatif stres, G-6-PD, Antioksidantlar, Serbest-SH, Detoksifikasyon.

II ABSTRACT CONJUGATION and TRANSPORT of XENOBIOTICS by N-ACETYL-L-CYSTEINE in HUMAN ERYTHROCYTES Glutathione is an important thiol containing compound involved in detoxification process in erythrocytes. Its thiol group reacts with a variety of xenobiotics in a glutathione S-transferase catalyzed reaction to form conjugates that are effluxed from the erythrocytes by an ATP dependent transport mechanism. A well studied experimental system is the transport of the conjugate of glutathione and l-chloro-2,4-dinitrobenzene. We investigated, whether N-acetyl-L- cysteine protects the free-SH content or replaces glutathione in detoxification process in glutathione predepleted erythrocytes. Our results indicate that N-acetyl-L- cysteine restores the intracellular free-SH content following depletion by l-chloro-2,4-dinitrobenzene and N-ethylmaleimide. N- acetyl-L-cysteine (10 mM) increased the intraerythrocyte free-SH level to 14 ± 1 umole/ml erythrocyte in 10 minutes in erythrocytes treated with N-ethylmaleimide. The control levels was 5 ± 0.1 ^unol/ml RBC. Results showed that N-acetyl-L-cysteine, in the presence and absence of L- buthionine sulfoximine, significantly recovered the l-chloro-2,4-dinitrobenzene detoxification process in erythrocytes. The transport rate in glutathione predepleted and N-acetyl-L-cysteine treated erythrocytes was 449 ± 38 nmol/ml erythrocyte. In the absence of N-acetyl-L-cysteine the rate of the transport was 214 ± 21 nmol/ml erythrocyte which remained similar to the control. Our results suggest that N-acetyl-L- cysteine recovers the dinitrophenyl-glutathione transport and also replaces glutathione in detoxification of l-chloro-2,4-dinitrobenzene in glutathione predepleted erythrocytes. 2003, 62 pages Keywords: GSH, GSH Conjugates, Erythrocyte, Xenobiotics, NAC, Oxidative stress, G-6-PD, Antioxidants, Free-SH, Detoxification, Antioxidants.