Immunoblot assay for the detection of helicobacter pylori anti-cagA and anti-vacA antibodies in dyspeptic patients

Abstract

IV PEPTİK ÜLSER HASTALARINDA ANTI-CagA ve ANTI-VacA ANTİKORLARININ TARANMASINDA IMMUNOBLOT TEKNİĞİ M. Fatih ABASIYANIK MASTER TEZİ TEZ DANIŞMANI: Dr. BARIK SALİH ANAHTAR KELİMELER: Helicobacter pylori, CagA, VacA, Peptic Ulcer Diseases, ELISA, Immunoblotting. OZET Helicobacter pylori bakterisi peptik ülser hastalıklara yol açacıcı ajan olarak anılmaktadır. Virulens faktörler olarak CagA ve VacA antijenlerinin varlığının bu hastalıkların çıkışında ve patojenliğinde önemli bir rol aldığı bulunmuştur. Çalışmanın amacı; peptik ülser hastalarında ELISA testi vasıtası ile anti-Helicobacter pylori antikorlarını ve immunoblot testi ile de anti-CagA ve anti-VacA antikorlarını taramak ve anti-CagA ve de anti-VacA antikorları ile bu hastalıklar arasındaki ilişkinin ne olduğunu belirlemekti. Materyal ve Metod: Okmeydanı ve Samatya SSK hastanelerine gelen yaşlan 16-80 arası olan (ortalama 40) 26*sı erkek. 19`u kadın 45 hasta endoscopiye tabi tutuldu. CLO, kültür ve de histopatoloji için olmak üzere her bir hastadan 5 tane antral biyopsi alındı. Ayrıca her hastadan serolojik tahliller içinde serum alındı. Sonuçlar: ELISA testi, CLO ve histopatoloji testlerinin pozitif olarak gösterdiği 39 hastanın 32 sinde pozitifti. Test % 82 sensitiv, % 83 spesifik iken, testin tahmini pozitif değeri ile tahmini negatif değeri sırasıyla % 97 ve % 42 olarak bulunmuştur. Western blot testi ile 116 (CagA) kDa, ve 89 (VacA) kDa bandları tarandı. Sadece 3 hasta 89 kDa (VacA) positif çıktı. Tartışma: ELISA testi H. pylori antikorları taramasında faydalı olduğu görüldü. Anti- CagA antikoru ile duodenal ülser (83 %), gastrit (%78), gastrik kanser (100%), ve gastrik ülser ( 1 00%) arasında kayda değer bir ilişti var oldadığı müşayede edildi, ki bir sonraki çalışmada CagA antijeninin Peptik ülser hastalıklarında ki nasıl bir patojenik etkiye sahip olduğunun araştırılması tavsiye edilmektedir.

HI IMMUNOBLOT ASSAY FOR THE DETECTION OF HELICOBACTER PYLORI ANTI-CagA & ANTI-VacA ANTIBODIES IN DYSPEPTIC PATIENTS MUSTAFA FATİH ABASIYANIK MSc. Thesis Thesis Supervisor: Dr. BARIK SALİH KEYWORDS: Helicobacter pylori, CagA, VacA, Peptic Ulcer Diseases, ELISA, Immunoblotting. ABSTRACT H. pylori has been incriminated as a causative agent of peptic ulcer diseases. The possession of CagA & VacA virulence factors was found to play a role in the pathogenesis & the outcome of the disease. The aim of the study was to detect anti-H.pylori antibodies in dyspeptic patients by the ELISA test, to detect the presence of anti-CagA & anti-VacA antibodies & to determine their association with peptic ulcer diseases (PUD). Material & Methods: 45 patients (26M.19F) age 16-80 years (average 40) attended the `Okmeydanı & Samatya SSK` hospitals were undergone endoscopy. 5 antral biopsies were obtained for CLO, culture & histopathology. Serum sample from each patient was also collected. Results: The ELISA test was (+) in 32 out of 39 patients that were CLO (+) & histopathology (+). The test showed 82% sensitivity. 83% specificity, 97% positive predictive value, & 42% negative predictive value. Western blot analysis detected a 1 16kDa (CagA), & 89kDa (VacA) bands. Only 3 patients (10%) were VacA (+). Conclusion: The ELISA test was found to be useful for the detection of H.pylori antibodies. There wasn't a significiant association between the presence of anti-CagA antibodies & duodenal ulcer (85%). gastritis (79%), gastric cancer (100%) & gastric ulcer (100%), which further substantiate the role of CagA in the pathogenesis of PUD.