Moleculer cloning, expression and purification of laccase enzyme from Shewanella putrefaciens

Abstract

Shawenalla putrefaciens topraktan ve denizden izole edilebilen, lakkaz aktivitesi içeren gram negatif bir bakteridir. Metabolik olarak manganez kullanırlar ve demiri indirgeyebilen fakültatif anerobtur. Hem katı hem de sıvı ortamda parlak pembe renkleriyle ayrılırlar. Ortam koşullarının değişmesine çok dayanıklı bir mikroorganizmadır. Lakkazların mantar ve gelişmiş bitkilerin yani sıra çoğu bakteri türünde de yaygın olarak bulunduğu, homolojik olarak yapılan protein bilgi bankası ve bakteri genom araştırmaları ile tespit edilmiştir. Lakkaz geni hem fungal sistemlerden hem de çeşitli bakterilerden klonlanıp fonksiyonel analizleri yapılmıştır. Bu çalışmada, daha önce lakkaz geninin varlığı bilinen ancak karakterizasyonu yapılmamış olan S. Putrefaciens ATCC 8071 seçildi. S. putrefaciens'teki lakkaz geni indüklenebilir bir ekspresyon vektörüne klonlandı ve E.coli bakterisine aktarıldı. Aynı zamanda, lakkaz enzimi saflaştırılarak karakterizasyonu yapıldı.

Shewanella putrefaciens is a Gram-negative bacterium. S. putrefaciens is also a facultative anaerobe with the ability to reduce iron and manganese metabolically; that is, it can use iron and manganese as the terminal electron acceptor in the electron transport chain in both solid and liquid media, S. putrefaciens is often recognizable by its bright pink color. They are resistant to changeable environmental conditions. Laccases are also found to be widespread among bacteria, based on homology searches in protein databases and bacterial genomes. Laccase genes have been cloned from fungi and bacteria and then have been searched enzyme activity. In this study, we preferred S. putrepaciens ATCC 8071 because its laccase enzyme was not characterized before. Laccase genes in Shawenalla putrefaciens were transferred into E. coli with molecular cloning techniques. Also, laccase enzyme was purified and characterized.