Arabidopsis thaliana (L) Heynh. türünde ß-1,3-glukanaz kodlayan bazı genlerin fonksiyonlarının incelenmesi

Abstract

Bu çalışmada Arabidopsis thaliana (L.) Heynh. anterlerinde ß-1,3 glukanaz (kallaz) kodlayan AT3G23770 ve AT4G14080 genlerinin kalloz yıkımındaki fonksiyonunun belirlenmesi amaçlanmıştır. Bu amaçla, bu genlerin T-DNA nakavt mutantlarına ait tohumlar ABRC Stok Center (Columbus)'dan Prof. Dr. Rod J. Scott (Bath üniversitesi, İngiltere) aracılığı ile temin edilmiştir. Çalışmada, AT3G23770 geni için N859965 stok numaralı hat, AT4G14080 geni için ise CS850174 stok numaralı hat kullanılmıştır. Tohumlar labarotuvar ortamında çimlendirilmiş ve her iki mutant hata ait bitkiler fenotipik olarak incelenmiştir. Buna göre bitkiler 3-4 hafta sonrasında çiçeklenmeye başlamış ve baklalar gelişmiştir. Bu bitkilerin genotipleri gen spesifik PCR ile belirlenmiştir. PCR sonuçlarına göre N859965 mutant hattı için homozigot (aa), CS850174 hattı içinse heterozigot (Bb) bireyler belirlenmiştir. Ayrıca, bu bitkilerde erkek kısırlık ve bakla gelişimi incelenmiştir. Daha sonra, çalışmada her iki mutasyonu bir arada taşıyan hatlar (double mutant) elde etmek için melezlemeler yapılmıştır. Buradan elde edilen tohumlardan çimlenen melezlerin genotipleri özgün PCR aracılığı ile belirlenip homozigot genotipe sahip (aabb) bitkiler seçilmiştir. Double mutant bitkilerde çiçek, polen ve bakla gelişimleri hem sitolojik hem de fenotipik olarak incelenmiş, bakla başına düşen tohum miktarı belirlenmiştir. Çalışmada ayrıca, ilgili genlerin anlatımları RT-PCR ile araştırılmıştır.

The aim of this study was to determine the functions of the AT3G23770 and AT4G14080 genes encoding ß-1,3 glucanase (callase) during callose degradation in the anthers of Arabidopsis thaliana (L.) Heynh. The seeds of T ? DNA knock-out mutants deficient in these genes were obtained from the ABRC Stock Center (Columbus) through Prof. Dr. Rod J. Scott (University of Bath) . İn this study, the stock number N859965 and CS850174 lines were used for AT3G23770 and AT4G14080. The seeds were germinated under labarotary conditions and mutant lines were analyzed phenotypically. These plants started to have flowers and siliques after 3-4 weeks of germination. The genotypes of these plants were determined using gen specific PCR. Based on the PCR results, homozygote (aa) mutant line for the N859965 and heterozygote (Bb) individuals for the CS850174 line were found. Also, male sterility and silique growth were analyzed on these plants. Afterwards, double mutants were obtained by crossing. Then, the genotypes of the hybrids were defined using PCR and homozygote plants (aabb) were selected. Flower, polen an silique growth of the double mutant lines were analyzed both cytologically and phenotypically, and the frequency of seeds per siliques was determined. Also, the expression profiles of the genes used in this project were investigated using RT-PCR.