N-nitrosomorfolin`in malat dehidrogenaz enzimi üzerindeki in vivo ve in vitro etkileri

Abstract

6. ÖZET Bu çalışmada, kanserojenik ve mutajenik bir bileşik olan NMOR'in MDH enzimi üzerindeki in vivo ve in vitro etkileri incelendi. İn vivo çalışmalarda, farelere i.p. olarak 168 mg/kg NMOR verilerek belirli zaman aralıkları ile enzim aktiviteleri saptandı. NMOR'in enzimi 24. saatte % 20 oranında inhibe ettiği gösterildi. İn vitro çalışmada ise, saf siğır kalbi MDH'ı ve fare karaciğerinden elde edilen MDH enzi mi kullanılıp herbiri için % 50 inhibisyon oluştu ran NMOR derişimleri saptandı. I_Q saf enzim için derişim, 5,60 mM, karaciğerden elde edilen enzim içinse 12,67 mM idi. Zaman artırıldıkça enzim in- hibisyonunun arttığı, BSA ve NADH'm derişimleri artırıldıkça inhibisyonun azaldığı ve oksaloasetat derişiminin artırılmasının inhibisyonu etkilemedi ği gösterildi. İnhibisyon kinetiklerinin incelenmesi sonucu, NMOR'in enzimi nonkompetetif olarak inhibe ettiği53 bulundu. Dializ yöntemiyle NMOR'in enzime, TLC yöntemi ile de aminoasidlere bağlandığı gösterildi. Metabolizma çalışmaları sonucunda ise NMOR'in metabolitlerinin kendisinden daha tehlikeli bile şikler olduğu ve HDH enzimini, NMOR'a kıyasla yak laşık % 20 oranında daha fazla inhibe ettiği göz lendi*

70 SUMMARY The In Vivo and In Vitro Effects of N-Nitro- somorpholine on the Malate Dehydrogenase Enzyme. In this work, the in vivo and in vitro ef fects of NMOR, a cancerogenic and mutagenic com pound, on the MDH enzyme have been investigated. In in vivo studies, definite time intervals and enzymatic activities were established by ad ministering 168 mg/kg to mice intraperitoneally. It was demonstrated that NMOR brought about a 20% th inhibition of the enzyme at the 24*~ hour» As for the in vitro studies, pure bovine heart MDH and MDH enzyme obtained from the mouse liver were used and the NMOR concentrations bring ing about a 50% inhibition in each case were es tablished. The concentration of I5Q pure enzyme was 5«60 m M and that of the enzyme obtained from the liver 12.67 mM. It was demonstrated that with the increase of time the inhibition of the enzyme increased, but with the increase in DSA and NADH? oxaloacetate concentration did not bear any effect55 on the inhibition. Following studies made on the inhibition ki netics, it was established that the NMOR inhibited the enzyme noncompetitively. It was demonstrated by the dialysis method that NMOR was bound to the enzyme and by the TLC method, displayed a binding with the aminoacids. As a result of studies on the metabolism, it was observed that the NMOR metabolites were more dangerous compounds than NMOR itself and inhibited the MDH enzyme approximately 20%. more when com pared with NMOR.