Metilaz Hpa II enzimi yardımıyla fare kromozomlarının metilasyon bölgelerinin incelenmesi

Abstract

46 VI. ÖZET Bu araştırmada, 50 adet erkek fare (Musmusculus var. albinos) kullanılmış, kemik iliklerinden kromozomlar elde edilmiştir. Kromozomların hepsinin Akrosentrik yapıda oldukları ve 2n=40 adet yapıda oldukları saptanmıştır. Ayrıntıları için standart bant teknikleri kullanılarak G ve C bant yapılmıştır. Bantlama sonucu, fare Y kromozomunun farklı C bant yapısı gösterdiği belirlenmiştir. Metillenebilen kromozom bölgelerinin belirlenebilmesi için önce kromozomlar Hpa II ve Msp I RE's enzimleriyle kesilmiş, Hpa II ve Msp I enzimlerinin fare koromozomlannda G bant yapısı verdikleri saptanmış tır. Normal süreler uzatıldığında ise G bantı yerine C bant yapısının ortaya çıktığı gözlenmiştir. Metilaz Hpa II, Hpa II ve Msp I'e ait tampon çözeltiler kullanıldığında kromozomların boya alışlarında azalmalar olduğu saptanmıştır. Ayrıca Hpa II enziminin kromozomlarda kromatid ayrılmasına neden olduğu görülmüştür. Metilasyon için kullanılan metilaz Hpa II (0.5 ü/ul) enziminin, S- adenosilmetioin'den aldığı işaretli (H^) metil grubunu, fare kromozomlarının majör ve minör satellit bölgelerine taktığı otoradyografi ile belirlenmiştir.

47 VII. SUMMARY INVESTIGATION OF THE METHYLATION REGIONS OF THE MOUSE CHROMOSOMES USING METHYLASE HpaH ENZYME In this research work, 50 male nüce (Mus musculus var. albinos) have been used and chromosomes obtained from their bone marrows. It has been determined that all the chromosomes were acrocentric in structure and had 2n= 40 structures. Standart banding techniques were used for details and G and C bandings were applied. As a result of banding, it has been established that the mouse Y chromosome showed a C band structure. In order to identify the chromosome regions that could be subjected to methylation, the chromosomes were subjected to cleavage with their Hpa II and Msp I RE's enzymes and it was establised that the enzymes displayed a G band structure in the mouse chromosomes. It has been observed that the C band structure replaced that of G band when the normal periods were extended. When buffer solutions of methylase Hpa II, Hpa II and Msp I were used, it was noted that there was a decrease in the staining of the chromosomes. It was also observed that chromatid separations in the chromosomes of Hpa II enzyme occurred. It has been determined by autoradigraphy that the methylase Hpa II (0,5 u/il) enzyme used for methylation attached the marked (H^) methyl group taken from S-Adenosylmethionine to the major and minor satellite regions of the mouse chromosomes.