Manisa ve çevresinde echinococcus granulosus izolatlarının moleküler tanısı

Abstract

Echinococcus granulosus insanda ve birçok evcil hayvanda Kistik Ekinokokkozis'e (KE) neden olan etkendir ve hala dünyada ve Türkiye'de en önemli sağlık problemlerinden biridir. Metasestodlarla infeksiyon şiddetli hastalıklara ve yüksek ekonomik kayıplara neden olur. Bazı Echinococcus suşları, suşların epidemiyolojik ve biyolojik karakteristiklerine dayanarak tanımlanmaktadır. Bu çalışmanın amacı, Türkiye'de Manisa ilindeki sığır, koyun ve insanlardan elde edilen Echinococcus granulosus izolatlarının PZR, PZR-RFLP ve DNA Dizileme yöntemleri ile moleküler karakterizasyonunun belirlenmesidir. Çalışmamızda sığır, koyun ve insanlardan elde edilen toplam 60 örnek incelenmiştir. Örnekler 2010-2013 yılları arasında Manisa merkez mezbahası, Turgutlu kesimhanesi, Turgutlu Halil Beyli köyü kesimhanesi ve Celal Bayar Üniversitesi Hastanesinden elde edilmiştir. Total genomik DNA (gDNA) üretici firmanın talimatları doğrultusunda protoskoleks ve kistik germinal membranlardan RTA-DNA İzolasyon Kiti kullanılarak izole edilmiştir. PZR'dan sonrası, E.granulosus izolatların genetik karakteristiklerini araştırmak için ITS-1 gen bölgesi restriksiyon enzimleri ile kesilmiş ve mitokondrial CO1 ve NAD1 genleri deoksiribonükleik asit dizileme ile ABI Prism Genetik Analizör 3100 cihazında çalışılmıştır.Çalışmamızın sonucunda, tüm sığır, koyun ve insan izolatları Echinococcus granulosus koyun suşu olarak teşhis edilmiştir. Bu çalışma Manisa ilindeki Echinococcus izolatlarının ilk moleküler genotiplendirme çalışmasıdır.

Echinococcus granulosus is the causative agent of cystic echinococcosis (CE) in humans and many domestic animals, and still one of the most important global health problem in the world and in Turkey. Infection with metacestodes cause severe illness and high economic losses. Several strains of Echinococcus have been identified based on the epidemiological and biological characteristics of strains.The aim of this study is to identify molecular characterization of Echinococcus granulosus isolates which were obtained from cattles, sheep and humans by using PCR, PCR-RFLP and DNA Sequencing methods in Manisa province of Turkey.In this study, a total of 60 individual hydatid cyst samples from cattle, sheep and humans were examined. They were obtained from central slaughterhouse, Turgutlu slaughterhouse, Turgutlu Halil Beyli village slaughterhouse and Celal Bayar University Hospital in the province of Manisa/Turkey between 2010-2013. The total genomic DNA (gDNA) was extracted using RTA-DNA Isolation Kit according to manufacturer instructions from protoscoleces and cystic germinal membranes. After PCR, to investigate the genetic characteristics of Echinococcus granulosus isolates, ribosomal ITS-1 gene region was digested by using restriction enzymes and deoxyribonucleic acid sequencing of the mitochondrial CO1 and NAD1 genes were performed with ABI Prism Genetic Analyzer 3100 instrument.As a result of our study, all cattle, sheep and human isolates were detected as Echinococcus granulosus sheep strain. This is the first molecular study report genotyping of Echinococcus isolates in Manisa province.