Oosit İn vitro maturasyonunda pacap (Pituitary Adenylate Cyclase-Activating Polypeptide)in ve reseptörlerinin etkisi

Abstract

Amaç : Bu çalışmada oosit gelişiminde önemli rol oynadığı bilinen PACAP'ın in vitro maturasyondaki rolünün araştırılması amaçlanmıştır.Gereç ve yöntem; Çalışmamızda 21 ile 24 günlük 10 adet dişi fareye intraperitonel olarak 5IU pregnant mare's serum gonadotropin verilerek ovaryan indüksiyon gerçekleştirildi. 48 saat sonra hayvanlar sakrifiye edildi ve ovaryumları alındı. Overlerde bulunan immature oositler (GV) granüloza hücrelerinden ayrıldı, temel bir hücre kütürü mediumu olan DMEM; IVF laboratuvarlarında kullanılmakta olan ticari bir IVM medium ve 450 ng PACAP eklenmiş IVM medyum (IVM+PACAP) içerisinde kültüre edildi. MII oositler üzerinde hem whole mounth tekniği ile PACAP ve reseptörlerinin (PAC1, VPAC2, VIP) polyclonal primer antikoru kullanılarak immünofloresans boyanması ve qRT-PCR ile genetik analizleri gerçekleştirildi.Bulgular; Oositlerin 24 saat kültür aşaması sonrasında; DMEM grubunda maturasyon oranı (%51), IVM grubunda maturasyon oranı (%53), IVM+PACAP'ın uygulandığı grupta (%57) maturasyon oranı tespit edildi. PAC1,VPAC1,VIP primer antikorlarıyla whole mounth immünofloresans analizleri sonrasında farklı oranlarda immünorektivite değerleri tespit edildi.Sonuçlar: In vitro maturasyon mediumlarına PACAP eklenmesi oosit maturasyonu arttırmaktadır, ancak maturasyon sırasında fonksiyon gösteren reseptörlerin ve etki mekanizmalarının tam olarak tespit edilebilmesi için elde edilen oosit sayısının arttırılmasına ve daha ileri tekniklere ihtiyaç duyulmaktadır.

Amaç : Bu çalışmada oosit gelişiminde önemli rol oynadığı bilinen PACAP'ın in vitro maturasyondaki rolünün araştırılması amaçlanmıştır.Gereç ve yöntem; Çalışmamızda 21 ile 24 günlük 10 adet dişi fareye intraperitonel olarak 5IU pregnant mare's serum gonadotropin verilerek ovaryan indüksiyon gerçekleştirildi. 48 saat sonra hayvanlar sakrifiye edildi ve ovaryumları alındı. Overlerde bulunan immature oositler (GV) granüloza hücrelerinden ayrıldı, temel bir hücre kütürü mediumu olan DMEM; IVF laboratuvarlarında kullanılmakta olan ticari bir IVM medium ve 450 ng PACAP eklenmiş IVM medyum (IVM+PACAP) içerisinde kültüre edildi. MII oositler üzerinde hem whole mounth tekniği ile PACAP ve reseptörlerinin (PAC1, VPAC2, VIP) polyclonal primer antikoru kullanılarak immünofloresans boyanması ve qRT-PCR ile genetik analizleri gerçekleştirildi.Bulgular; Oositlerin 24 saat kültür aşaması sonrasında; DMEM grubunda maturasyon oranı (%51), IVM grubunda maturasyon oranı (%53), IVM+PACAP'ın uygulandığı grupta (%57) maturasyon oranı tespit edildi. PAC1,VPAC1,VIP primer antikorlarıyla whole mounth immünofloresans analizleri sonrasında farklı oranlarda immünorektivite değerleri tespit edildi.Sonuçlar: In vitro maturasyon mediumlarına PACAP eklenmesi oosit maturasyonu arttırmaktadır, ancak maturasyon sırasında fonksiyon gösteren reseptörlerin ve etki mekanizmalarının tam olarak tespit edilebilmesi için elde edilen oosit sayısının arttırılmasına ve daha ileri tekniklere ihtiyaç duyulmaktadır.