İn vitro maturasyonda dominant folikül belirlenmesinde intraselüler ve ekstraselüler mekanizmalar

Abstract

Amaç: Dominant folikül seçiliminde ve oosit olgunlaşmasında etkili olan hücre içi ve hücreler arası etkileşimlerin ovaryum kültürü yapılarak belirlenmesi ve aktivin ve akteosidin oosit maturasyonuna etkilerinin araştırılması amaçlanmıştır. Gereç ve Yöntem: Toplam 24 erişkin dişi farelerden alınan ovaryum dokuları 6 parçaya bölünerek M2 kültür vasatı içerisinde kontrol (grup 1), aktivin (grup 2), akteosid (grup 3), akteosid+aktivin (grup 4) grupları olmak üzere 10 gün kültüre edildi. Kültür vasatları 0., 6. ve 10. günlerde toplanarak cAMP seviyeleri ELISA yöntemi ile analiz edildi. Kültür sonunda follikül sayıları direkt sayıldı, örneklerin bir kısmı histolojik analizler için hematoksilen-eozin ile boyanır iken, kalan dokulardan oositler toplanarak immunohistokimyasal analiz ile Siklin-B1, MPF, MOS ve BMP-2 dağılımları, Mitotracker ile mitokondri yoğunluğu, ELISA yöntemi ile DNA metilasyon miktarlarına bakıldı. Bulgular: Kontrol grubuna oranla diğer gruplarda follikül sayılarının arttığı, en fazla follikül sayının grup 4 de olduğu görüldü. Siklin-B1, MPF ve MOS immunoreaktivitesinin grup 2, 3 ve 4'te arttığı görülürken, BMP-2 immunoreaktivitesinin değişmediği görüldü. Mitokondri yoğuınluğunun grup 4 ve grup 2 de arttığı, cAMP seviyesinin ve DNA metilasyonunun grup 4 de diğer gruplara nazaran daha fazla olduğu görüldü.Sonuçlar: Ovaryum doku kültürü sırasında kültür ortamına akteosid ve aktivin ilavesinin dominant folikül olgunlaşmasını desteklediği görüldü. Bununla beraber kültür vasatından cAMP ölçülmesinin maturasyon tespiti için alternatif bir yöntem olabileceği sonucuna varıldı.Anahtar Sözcükler: Dominant folikül seçilimi, akteosid, aktivin, ovaryum kültürü.

Aim: The aim of this study was to determine the intracellular and extracelluler mecanisms of oocyte maturation and dominant follicle selection wia ovarian tissue culture and the effects of activin-A and acteosid over oocyte maturation. Matherial an methods: Ovarian tissues from 24 adult female rats were divided into 6 parts and cultured in M2 culture medium for 10 days as control (group 1), activin (group 2), akteocide (group 3), akteocide + activin (group 4) groups. Cultures were collected at days 0, 6, and 10 and cAMP levels were analyzed by ELISA. At the end of the culture, follicle numbers were directly counted. Siklin-B1, MPF, MOS and BMP-2 distributions by immunohistochemical analysis, mitochondrial density by Mitotracker, DNA methylation by ELISA method were determined by immunohistochemical analysis by collecting oocytes from the remaining tissues while some of the samples were stained with hematoxylin-eosin.Findings: It was seen that follicle counts increased in the other groups compared to the control group, and group 4 was the most follicle counts. Cyclin-B1, MPF and MOS immunoreactivity increased in groups 2, 3 and 4, while BMP-2 immunoreactivity did not change. Mitochondrial density increased in group 4 and group 2, cAMP level and DNA methylation were found to be higher in group 4 than in the other groups.Results: It was observed that the addition of akteocide and activin to the culture medium during ovarium tissue culture promoted the dominant follicle maturation. However, it has been concluded that measurement of cAMP from culture medium may be an alternative method for maturation detection.Key words: Dominant follicle selection, acteosid, activin, ovarian culture.