Development and testing of a protocol for creating live cell arrays towards measuring functional cell response and cell-cell interactions in high-throughput

Abstract

Hücrelerde çevrenin, farklı antikor ve titrelerin etkisini test etme birçok hastalık için yeni tedavilerin keşfinde gerekli tekniktir. Tedavi edici stratejilerin birçoğu birden fazla unsurun birleşimine ihtiyaç duyar; mesela belirli bir hücre tipinin ilgili antikor ile birleşimi gibi. Bu antikorların tanımlanması birçok sınırlaması olan hücre bazlı tarama testleri ile gerçekleştirildi. Bu sınırlamaların üstesinden gelmek için, canlı hücre testleri tekniği geliştirildi. Çalışmamızda biz, hücre-hücre etkileşimi ve hücre yanıtına yüksek veri ölçümü sağlayan, lam üzerindeki canlı hücreleri tahlil etmek için bir teknik geliştirmeyi hedefledik. Bu da, örneklemek için tek katman konflüent kültür oluşturulması ve istenen hücrelerin cam yüzeye tutunmasına ihtiyaç duyar. Bu tezde biz, bispecifik T-cell hücresinin kanser hücresi ile etkileşimini gösteren tahlil geliştirmek için HT-29 ve HT- 1080 iki hücre tipini silan işlevli lam üzerinde çeşitli hücre tutunma şekillerini test ettik. Böylece biz diğer hücrelerin fonsiyonel hücre yanıtları olan hücre göçü, yayılması, sekresyonu ve koordineli etkileşimini test etmek için, canlı hücre dizileri oluşturulmasında kullanılan hücre kaplı lamlar üretiminde tutarlı, kontrol edilebilir, tekrarlanabilir kaplama protokolleri oluşturduk. Anahtar Kelimeler: Hücre Dizileme, Hücre Kaplı Yüzeyler, HT-29 Hücre Hattı, HT- 1080 Hücre Hattı, Hücre Dışı Matris

Testing the effect of the environment and the effect of different antibodies and titers on the cells is a required technique to discover new treatments for many diseases. Many of the therapeutic strategies need the integration of more than one element, such as the integration of antibody with specific type of cells. Identification of such antibodies has been accomplished with the cell-based screening assays which has many limitations. To overcome those limitations, living cell arrays technique has been created. In our work we aimed to develop a technique for producing arrays of live cells on a glass slide that allow for high throughput measurements of cell response and cell-cell interactions. That requires the adhesion of the target cells on the glass slide and forming a confluent monolayer in order to be patterned. In this thesis, we have tested various cell adhesion matrices (ECM gel, Lam, VTN and FN) on silane-functionalized glass slides with two cell lines, HT-29 and HT-1080, towards developing an assay for bi-specific antibody enhanced T-cell attachment to cancer cells. We have created a robust, controlled, and repeatable coating protocol for producing cell-coated slides that can be used for creating live cell arrays for testing functional responses of cells such as migration, proliferation or secretion, and coordinated interactions with other cells.Keywords: Cell Patterning, Cell-Coated Slides, HT-29 Cell Line, HT-1080 Cell Line, ECM.