Kümülüs hücre kültüründe apoptosis ve luteinizasyon sürecinin IVF hastalarında embriyo gelişimi ve gebelik açısından değerlendirilmesi

Abstract

Ovulasyon öncesi dönemde oosit etrafında kümülüs matriksinin hızla oluşumu yegâne ve dinamik biyolojik bir olaydır. Oositi çevreleyen granüloza hücreleri kümülüs oophorusu oluşturur. Kümülüs hücreleri, üreme hücrelerinin yeterli beslenmesi ve gelişim kapasitesine ulaşmasında önemli bir konuma sahiptir. Oosit çevresindeki kümülüs, granulosa ve teka hücreleri steroid sentezi ile oosit maturasyonuna katkıda bulunurlar. Kümulus granulosa hücrelerinde apoptoz normal süreçte ortaya çıkmaktadır ve kümülüs apoptozunun oosit olgunlaşması ile ilişkisi bulunmaktadır. Ayrıca erken luteinizasyonun progesteron salgısı ile oosit kalitesini bozduğu ve gebeliği negatif etkilediği konusunda çalışmalar bulunmaktadır. Yapılan çalışmalar bu hücrelerde yüksek apoptozun gebeliği negatif etkilediğini göstermiştir. Bu çalışmada kültür ortamında bırakılan kümülüs hücrelerinin apoptoza gidiş sürecinin ve luteinizasyon belirtisi olan progesteron sekresyonunun embriyo gelişimi, morfolojisi ve gebelik ile ilişkisinin incelenmesi amaçlandı. Bu araştırma Eylül 2017- Nisan 2018 tarihleri arasında Bahçelievler Medical Park Hastanesi Tüp Bebek Kliniğine başvuran herhangi bir endikasyonu olmayan 40 IVF hastası kadından alınmış olan kümülüs granulosa hücrelerinin kültürü ile gerçekleştirildi. Bu amaçla çalışma 'Biruni Üniversitesi Girişimsel Olmayan Etik Kurul'una sunuldu ve 2017/5-8 sayı ve 26.04.2017 tarihli etik kurul onayı alındı. Kümulus granulosa hücre örnekleri hyaluronidaz uygulaması sonrası alındı 2 kez HTF solüsyonunda yıkandı ve 5x105 /ml konsantrasyonunda hücreler ekilerek sonrasında 24 saat,48 saat,72 saat,96 saat'lik periyotlarla takip edilerek apoptotik hücre oranları çıkarıldı ve HCG günü serum progesteron ölçümleri yapıldı. Bu çalışmada gebe olan grupta kümülüs hücre apoptozunun gebe olmayanlara kıyasla daha düşük olduğu, (p=0,023), HCG günü progesteron değerinin gebe olmayanlarda daha yüksek olduğu gösterildi (p= 0,021). Kültürde 4. Güne kadar elde edilen verilerden apoptoz oranının gebe olmayanlarda daha yükselen bir eğilim gösterdiği ve bunun da istatistiki olarak anlamlılığı olduğu anlaşıldı (p=0,009). Çalışmamızda 4. Güne kadar apoptotik hücre oranının hCG günü progesteron değeri ile pozitif korelasyon gösterdiği bulundu (p= 0,001). Bu çalışmada kümülüs hücre apoptozunun ve hCG günü progesteron değerinin klinik gebelik ve embriyo kalitesi ile ilişkisi bulunduğu anlaşılmıştır. Çalışmanın daha geniş gruplarda ayırıcı değerlerinin (cut off) ortaya çıkarılmasında yarar görülmektedir.

Evaluatıon Of Embryo Development And Pregnancy In Ivf Patıents Wıth Apoptosıs And Luteınızatıon Process In Cumulus Cell CultureThe rapid formation of the cumulus matrix around the oocyte in the pre-ovulation period is a unique and dynamic biological event. Granulosa cells surrounding the oocyte form a cumulus oophorus. Cumulus cells play an important role in ensuring adequate nutrition and growth capacity of reproductive cells. Cumulus, granulosa and teka cells around oocytes contribute to oocyte maturation by steroid synthesis. Apoptosis occurs in the normal process of cumulus granulosa cells and cumulus apoptosis is associated with oocyte maturation. There are also studies that early luteinization deteriorates oocyte quality with progesterone secretion and negatively affects pregnancy. Studies have shown that high apoptosis negatively affects pregnancy in these cells. In this study, it was aimed to investigate the progression of cumulus cells left in culture to apoptosis and progesterone secretion, which is a sign of luteinization, the relationship between embryo development, morphology and pregnancy. This study was carried out with the culture of cumulus granulosa cells taken from 40 IVF women without any indication who applied to Bahçelievler Medical Park Hospital IVF Clinic between September 2017 and April 2018. For this purpose, the study was submitted to the uni 'Biruni University Non-Interventional Ethics Committee' ve and approval of the Ethics Committee dated 26.04.2017 and numbered 2017 / 5-8. Cumulus granulosa cell samples were taken after application of hyaluronidase, washed twice in HTF solution and cells were seeded at a concentration of 5x105 / ml, followed by 24-hour, 48-hour, 72-hour, 96-hour periods, and apoptotic cell rates were measured and serum progesterone measurements were performed on HCG day. In this study, it was shown that cumulus cell apoptosis was lower in the pregnant group compared to the non-pregnant group (p = 0.023), and progesterone value on HCG day was higher in non-pregnant group (p = 0.021). From the data obtained until the 4th day of culture, it was understood that apoptosis rate showed a higher tendency in non-pregnant women and this was statistically significant (p = 0.009). In our study, it was found that the ratio of apoptotic cells up to the 4th day showed a positive correlation with the progesterone value on hCG day (p = 0.001). In this study, it was understood that cumulus cell apoptosis and hCG day progesterone levels were associated with clinical pregnancy and embryo quality.