Laktik asit bakterilerinin tannaz üretim yeteneklerinin araştırılması

Abstract

Bu çalışmada, daha önceki çalışmalarda fermente ürünlerden izole edilen 49 izolatın saflaştırması yapılmış ve seçilen bu izolatların riboprinter sistem ile tanımlamaları yapılmıştır. Spektrofotometrik ve görsel okuma metodu ile en yüksek aktiviteyi MT4 izolatı göstermiştir. İnce Tabaka Kromatografisi kullanılarak tannik asitten oluşan gallik asitin dekarboksilaz aktivitesi ile pirogallol ürünü gözlemlenmiştir. Seçilen birkaç izolatta SDS-PAGE yöntemi ile enzimin yaklaşık moleküler ağırlığı belirlenmiştir. Yüksek tannaz aktivitesi gösteren 9 izolat belirlenmiş ve gösterdikleri tannaz aktivitesi üzerine farklı sıcaklık, pH, substrat yoğunluğu, tannik asit konsantrasyonu ve çeşitli minerallerin etkisi araştırılmıştır. Yapılan testler sonucunda optimum sıcaklık 370 C, pH 5.0 substrat olarak kullanılan metil gallat konsantrasyonu 7 mM, tannik asit konsantrasyonu ise 1,75 mM olarak bulunmuştur. Hg+2 ve Mg+2 iyonlarının varlığında tannaz aktivitesi düşerken, Ca+2 ve Zn+2 laktik asit bakterilerinin tannaz aktivitesi üzerine etki yapmadığı görülmüştür. K+ tannaz aktivitesinde azda olsa artışa neden olmuştur. Ayrıca sürfaktan (Tween 80), şelat (EDTA), inhibitör (DMSO) ve denatüre edici ajan (Üre) ların da tannaz aktivitesine tesir etmediği saptanmıştır.Anahtar Kelimeler: Tannaz, Laktik Asit Bakterileri, Metil gallat, Pirogallol.

In this study, 49 isolates obtained from fermented products in previous studies were purified and these selected isolates were identified by DuPont Qualicon RiboPrinter® system. Spectrophotometric and visual reading method indicated that isolate MT4 showed the highest activity. It was observed that pyrogallol product with the decarboxylase activity of gallic acid composed of tannic acid using the thin layer chromatography. The proximate molecular weights of the enzyme producing with some selected isolates were determined by SDS- PAGE method, and also the effect of different temperature, pH, substrate concentration, the concentration of tannic acid and various minerals on activity were investigated. As a result of the performed tests, the optimum temperature was found to be 370 C, pH was found to be 5.0, methyl gallate concentration used as the substrate was found to be 7 mM and tannic acid concentration was found to be 1.75 mM. While tannase activity of lactic acid bacteria decreases in the presence of Hg +2 and Mg +2 ions, does not show any changes in the presence of Ca +2 and Zn +2 ions. The presence of K+ ion was caused a slight increase in tannase activity. In addition, it was detected that surfactant (Tween 80), chelate (EDTA), inhibitor (DMSO), and denaturing agents (urea) have don?t effect on tannase activity.Keywords: Tannase, Lactic acid bacteria, Metyl gallate, Pyrogallol.