Isolation, characterization and identification of bacteria live in extreme conditions

Abstract

Mağaralar yaygın olarak kireçtaşı gibi kalkerli kayalardan meydana gelen,yer altındaki doğal, taşsı boşluklardır. Mağara derinleri ışık almaz bu sebeplemikrobiyal büyüme için farklı enerji kaynaklarına bağımlıdır, bu da mağaralarınkendilerine has bir mikrobiyal yük geliştirmesine sebep olur. Önceki çalışmalarFirmicutes, Actinobacteria ve α- β- ve γ- Proteobacteria filumlarının bu alanlardakidominant üç filum olduğunu ortaya koymuştur. Ayrıca, yakın zamanda bakterilerinmağaradaki çökelti ve oluşumlarda rol alıyor olabilecekleri öne sürülmüştür. Bunaek olarak, mağara çalışmalarının sayısı enzim, antibiyotik ve biyoyakıt gibi önemlisekonder metabolit üreticisi mikroorganizmaların potansiyel barınma yerleri olmasısebebi ile gittikçe artmaktadır.Bu çalışmada kültür bağımlı ve kültür bağımsız teknikler kullanılarak Mersinilinde bulunan Gilindire Mağarasının bakteriyel yükü araştırılmıştır. Örnekler sterilswablar ile alınmış, distile su içerisinde tutularak kültüre alınana kadar +4°Cderecede saklanmıştır. Kültüre alımda ekim öncesinde swabların bekletildiği sular103 kat seyreltilmiştir. Mağara mikrobiyolojisi çalışmalarında sıklıkla kullanılan R2Abesiyeri kültür ortamı olarak kullanılmış farklı görünen koloniler seçilerek izoleedilmişlerdir. İzolasyondan sonra 16S rRNA PCR analizleri yapılmıştır. 7Actinobacteria (39%), 6 Proteobacteria (%33), 3 Firmicutes (17%) ve 1Bacteriodetes (5,5%) ile 1 kültüre alınmamış organizma (5,5%) bulunmuştur.

Caves are formed by rocks, most commonly by calcareous rocks such aslimestone and are natural, rocky cavities under the ground. Deeps of the cavereceive no light therefore it depends other potential energy sources for microbialgrowth. Thus, each cave forms its own microbial community. Previous studiesshowed Firmicutes, Actinobacteria and α- β- and γ- Proteobacteria are threedominant phyla that inhabit cave environments. Furthermore, it is recentlysuggested that bacteria may also have a role in cave formations and depositions.In addition to that, the number of cave studies increase rapidly due to theirpotential to host microorganisms that can secrete secondary metabolites that maybe of value to humans e.g. Enzyme, antibiotic and biofuel production.In this study bacterial load of Gilindire Cave located in Mersin wasinvestigated by using culture dependent and culture independent methods.Samples were taken by sterile swabs and submersed in distilled water and storedin +4°C degrees until culturing. For culturing the water that samples weresubmersed in was diluted 1000 fold before plating. R2A media which is widely usedfor cave microbiology research was used as culture media and distinct lookingcolonies were picked from the petri dishes and isolated. After isolation, 16S rRNAPCR analysis was performed. 7 Actinobacteria (39%), 6 Proteobacteria (%33), 3Firmicutes (17%) and 1 Bacteriodetes (5,5%) as well as 1 uncultured organism(5,5%) was found.