İntegrin Beta altünitesi CDNA` larının northern blot ile analizi uygun yöntemlerin araştırılması

Abstract

ÖZET Integrinler hücrelerin hem diğer hücrelerle hem de ekstraselüler matriks proteinleri olan, laminin, fibronektin, vitronektin ve kollajen ile adhesif etkileşiminde rol oynayan büyük bir heterodimerik hücre yüzey glikoprotein ailesidir. Bu çalışmada Kanada Dalhouse Üniversitesi Tıp Fakültesi Mikrobiyolohji İmmünoloji Bölümünde homolojik PCR yöntemi ile elde edilen yeni bir p alt ünitesine ait üç cDNA kullanılmıştır. Bu cDNA lan taşıyan plazmidler E.coli CM 611 susunda klonlanmış ve plazmid izolasyonu için iki farklı yöntem denenmiştir. Bunlardan alkalen lizis metodunun bizim laboratuvar koşullarımız için en uygun metod olduğu belirlenmiştir, izole edilen plazmidler restriksiyon endonükleazlar ile kesilerek 35S ve Avidin Peroksidaz ile işaretlenmesi denenmiştir. Civciv embriyo fibroblastlarından T RNA (Total RNA) izolasyonu için GITC yönteminin en uygun yöntem olduğu belirlenmiştir. T RNA'lar ve işaretli olduğu düşünülen problar kullarılarak yapılan hibridizasyon sonucuna göre bu iki işaretleme yönteminin de laboratuvarımıztn şu anki koşullarına uygun olmadığı, daha uygun bir işaretleme yönteminin kullanılması gerektiği ortaya çıkmıştır. IV

SUMMARY The integrins are a large family of heterodimeric cell surface glycoproteins that play key roles in the adherence of cells to other cells and to extracellular matrix proteins, such as laminin, fibronectin, vitronectin and collagen. We have studied chicken p integrin subunit. Three integrin (3 subunit cDNAs previously obtained from Canada Dalhoüise University Medical Faculty, Department of Microbiology - Immunology by Homology PCR. Plasmids which have three integrin cDNAs are cloned in E.coli CM 611. We determined that alkaline lysis method is very efficient method for plasmid isolation in our laboratory conditions. This probes that thought labelled with 35S and avidine peroksidase, search as probes for hibridization with T RNA was obtained by GITC method from chicken embrio fibroblasts. According to hibridisation results, we think that this labelling techniques are not appropriate for our laboratory conditions. IV