Kolorektal kanserlerde K-ras ekson 1 mutasyonlarının SSCP analizi

Abstract

ÖZET Anahtar Kelimeler K-ras, p21ras, GTPaz, SSCP KOLOREKTAL KANSERLERDE K-ras EKSON 1 MUTASYONLARININ SSCP ANALİZİ SERAP SEVİL Protoonkogen olarak tanımlanmış ras genlerinin onkojenik formları, pek çok insan kanserlerinin gelişiminde rol oynamaktadır. H-ras (Harvey), K-ras (Kirşten), N-ras (Neural) genlerinin kodladıklan 21 kDa'luk proteinler, sinyal iletiminde moleküler anahtar rolü üstlenmiş, GTPaz aktivitesine sahip, plazma membran proteinleridir. Ras proteinleri, guanin nükleotidlerine bağlanarak sinyal üetimine katılırlar. GDP bağlı fomda inatifken, GTP bağlı formda aktiftirler. Araştırmamızda, kolorektal tümörlerde mutasyonlarına sıklıkla rastlanan, K-ras geninin l.eksonunu içeren bölgedeki mutasyonları saptamayı amaçladık. PCR (Polymerase Chain Reaction=Polimeraz Zincir Reaksiyonu) ile çoğalttığımız bu bölgedeki mutasyonları saptamada, hızlı, kolay ve hassasiyeti oldukça yüksek bir yöntem olan SSCP (Single Strand Conformation Polymorphism) analiz yöntemini kullandık. Poliakrilamid jellerde bantların görüntülenmesi için, ucuz, basit ve non-radyoaktif bir metod olan Gümüş Boyama yöntemini seçtik. 17 kolorektal dokunun 7'sinde (%41,3) mutant bantlar saptadık.

SUMMARY Key Words K-ras, p21ras, GTPase, SSCP DETECTION of K-ras EXON 1 MUTATIONS IN COLORECTAL CANCERS by SSCP ANALYSIS SERAP SEVİL The oncogenic forms of ras genes family which are noun as protooncogenes play an important role in the pathogenesis and development of various human neoplasms. The plasma membrane proteins having molecular weight of 21kDa, expressed by H-ras (Harvey), K-ras (Kirşten), N-ras (Neural) genes act as a molecular switch in signal transduction pathway and GTPase activation. They participate in the signal transduction pathway via binding to guanine nucleotides. They are active in GTP bound form and inactive in GDP bound form. In our study, we aimed to detect exon 1 of K-ras gene mutations in colorectal cancers. We used SSCP (Single Strand Conformation Analysis) methot as an easier, rapid and sensitive method, following PCR (Polymerase Chain Reaction) amplification of the exon 1 region has been carried out to detect point mutations. Polyacrylamide gels were stained by Silver Staining procedure as an alternative method to radioactive detection which is relatively cheaper and safer. We detected K-ras exon 1 mutations 7 of 17 (41,3%) colorectal tumour samples.