Brusellozların serolojik tanısında antijen eldesi ve hasta serumlarında antikor titre araştırması

Abstract

1.ÖZET Anahtar Sözcükler: Bruselloz, SAT, EIA, Tüm Hücre, Lipopolisakkarit. Brusellozlann Serolojik Tanısında Antijen Eldesi ve Hasta Serumlarında Antikor Titre Araştırması Dr. Şehnaz KOÇAK Dünyada ve ülkemizde halen yaygın olarak görülen bruselloz ekonomiye ve insan sağlığına verdiği zararlardan dolayı önemini günümüzde de korumaktadır. Brucella bakterilerinin geç ve güç üremeleri tanılarında serolojik testlerin önemini arttırmıştır. Aglütinasyon testleri serolojik tanıda çok kullanılır ve özellikle akut bruselloz varlığında önemlidir. Ancak kronik brusellozda inkomplet IgG ve IgA sınıfı antikorları oluştuğundan klasik aglütinasyon testleri ile antikorlar değerlendirilememektedir. Bu antikorları saptamada Enzyme Immuno Assay (EIA) önemli bir yer tutmaktadır. Ticari olarak piyasaya sunulmuş olan EIA testlerinin pahalı olması nedeniyle ülkemiz koşullarında kullanımı yaygınlaşmamıştır. Çalışmamızda bruselloz tanısının serolojik testlerinde kullanılan antijenler elde edilerek akut ve kronik hasta gruplarında bu antijenlerin kullanılmasıyla yapılan Standart Aglütinasyon Testi (SAT) ve EIA testleri karşılaştırıldı. EIA testinin özgüllük ve duyarlılığı belirlendi. Bakterinin tüm hücresi SAT'de, lipopolisakkariti (LPS) ise EIA testinde antijen olarak kullanıldı. EIA testinde hastalığa spesifik IgG, IgM ve IgA antikorları araştırıldı. Akut ve kronik bruselloz tanısı almış toplam 110 hasta incelemeye alındı. Akut hastalarda SAT'de titreler yüksek saptanmış olup sonuçların EIA IgM ve IgA ile uyumlu olduğu görüldü. Kronik hastalarda ise SAT litreleri düşerken EIA IgG titrelerinde yükseklik saptandı. Bu hasta grubunda EIA IgM titrelerinin 1:400'ün altında olduğu, 9 hastada (%13) ise negatif olduğu görüldü. Kronik brusellozlu 3 (%4.3) hastada ise SAT ile olumsuz bulunurken EIA IgG titrelerinde yükseklik gözlendiğinden bu hastalarda blokarı antikor varlığı düşünüldü. EIA testlerinde alınan sonuçlar için istatistiksel değerlendirme yapılarak; SAT titreleri 1:320'nin üzerinde olan hastaların akut 1:320'nin altında olan hastaların kronik bruselloz kabul edilebileceği saptandı. Her iki test yöntemleri arasında korelasyon da araştırıldı. Regresyon katsayısı akut hastalarda EIA IgM için 0.959, EIA IgG ve EIA IgA için 0.858 ; kronik hastalarda EIA IgM için 0.524, EIA IgG için 0.747, EIA IgA için ise 0.591 olarak bulundu. Yapılan çalışmada SAT temel alındığında akut hastalarda EIA IgG, IgM ve IgA için duyarlık ve özgüllük %100; kronik hastalarda IgG ve IgA için duyarlık %100, özgüllük %95, IgM için duyarlılık %75, özgüllük %79 olarak bulundu. Çalışmadaki veriler doğrultusunda SATnin rutin laboratuvar testi olarak akut hastalarda kullanılabileceği, kronik hastalarda ise blokan antikor varlığında yetersiz kaldığı görüldü. EIA testinin akut ve kronik hasta ayırımında, blokan antikor varlığında daha başarılı olduğu sonucuna vanldı.

SUMMARY Key Words: Brucellosis, SAT, EIA, Whole cell, Lipopolysaccarides Obtaining of Antigens, Quantitation of Antibodies in Patients Sera in Serodiagnosis of Brucellosis Şehnaz KOÇAK, M.D Brucellosis has been an infectious disease of worldwide importance consisting problems in human health and economy. It is still common worldwide and in Turkey. The slow and hard growth of brucella species on special cultures caused development of several serological tests. Agglutination tests are conventional in serological diagnosis especially in acute form of brucellosis. But these tests don't have actual value in detection of chronic brucellosis in which incomplete classes of IgG and IgA antibodies are formed. Enzyme Immunoassay (EIA) is used to detect these incomplete antibodies. But the available EIA tests have not been widely used in our country because of the economic problems and the high costs of these products. In this study, the antigens that has been used for serologic diagnosis of brucellosis were obtained and EIA tests were compered with the Standard Agglutination Test (SAT) both in acute and chronic patient groups. The specificity and sensitivity of EIA tests were calculated. The antigen used in EIA test was lipopolysaccarides (LPS) while the whole cell were the antigen of SAT. The specific IgG, IgM and IgA antibodies were detected in EIA test. In this study 110 patients diagnosed as acute or chronic brucellosis were examined. In acute patients high antibody titers were detected by SAT and these result were similar with IgM and IgA titers in EIA. On the other hand, in chronic patients, IgG titers in EIA were high while low titers found by SAT. EIA IgM titers were under 1:400 titers and 9 patients (13%) were negative in this patient group. In 3 chronic brucellosis cases (4.3%) the presence of blocking antibodies was thought because SAT was negative while IgG titer in EIA was high. On the base of the statistical comparement with EIA results we concluded that the patients with titers over 1:320 in SAT are diagnosed as acute brucellosis and under 1:320 are chronic. The correlations between the two test groups were also examined. In acute patients, regression coefficients were 0.959 for EIA IgM and 0.858 for both EIA IgG and IgA while they were 0.524 for EIA IgM, 0.747 for EIA IgG and 0.591 for EIA IgA. In chronic patients, on the base of the SAT results, in acute patients the specificity and sensitivity of EIA IgG, IgM and IgA 100% and in chronic patients the sensitivity of IgG and IgA was 100% while specificity was 95%, but for IgM the specificity and sensitivity were 75% and 79% respectively. These results suggested that SAT could be used as a routine method in acute patients, but not in chronic ones, EIA method was more successful in differentiation of acute and chronic patients in the presence of blocking antibodies.