Değişik risk gruplarında respiratuvar distres sendromunun prenatal tanısı amacıyla amniotik sıvı örneklerinde lesitin/sfingomyelin(LS) oranının ince tabaka kromatografisi (TLC) yöntemiyle belirlenmesi

Abstract

Anahtar Sözcükler: Respiratuvar distres sendromu, lesitin / sfıngomyelin oranı, surfaktan, ince tabaka kromatografisi, amniotik sıvı testleri. Araştırmacı İsmi: Zeynep TOKGÖZ Diyabet, hipotansiyon, erken doğum riski, sezeryan gibi risk grubu oluşturan gebeliklerde pulmoner surfaktan eksikliğinden kaynaklanan ve doğumdan sonraki ilk dakikalarda ortaya çıkan respiratuvar distres sendromunun (RDS) prenatal tanısının konulabilmesi amacıyla amniotik sıvı örneklerinde ince tabaka kromatografisi (TLC) yöntemiyle lesitin / sfıngomyelin (L/S) oranı testinin laboratuvara uyarlanmasını kapsayan bir çalışmadır. Vaginal ve transabdominal girişimle elde edilen 22 amniotik sıvı örneği çalışma grubunu oluşturdu. Klinik olarak RDS gelişmediği bilinen, vaginal girişimle elde edilen amniotik sıvı örnekleri pozitif kontrol grubu, 16. gebelik haftasında transabdominal yolla alman amniotik sıvılar da negatif kontrol grubu olarak kullanıldı. Amniotik sıvıdaki lipidlerin `Folch-type` ekstraksiyonundan sonra TLC tekniği kullanılarak silika jel üzerinde fosfolipidlerin aynmlanması sağlandı. Küprik asetat boyasıyla boyanan bandlar dansitometrik olarak incelendi. Lesitin ve sfingomyelin bandlannm dağılım yüzdeleri belirlenerek L/S oranı bulundu. Testin deney içi ve günler arası varyasyon katsayılarını belirlemek amacıyla pozitif ve negatif kontrol grubundan birer amniotik sıvı örneği kullanıldı. Her iki gruptan alınan birer amniotik sıvı örneği bir gün içerisinde beş kez ve başka bir amniotik sıvı örneği üç farklı günde tekrar edildi. 13Pozitif kontrol: shake test; pozitif. Standart Sapma (SD)= 0.05, deney içi varyasyon katsayısı (CV)= %2. Negatif kontrol: shake test; negatif. Standart Sapma (SD)= 0.05, deney içi varyasyon katsayısı (CV)= %4.2. Günler arası varyasyon katsayısı (CV)= %1.4, standart sapma (SD)= 0.03. Negatif ve pozitif kontrol grubunu oluşturan amniotik sıvıların tümü klinik sonuçlarına bakılmaksızın çalşıldı, bulunan L/S sonuçlan, bilinen klinik sonuçlarla karşılaştırıldı. RDS gelişimi gözlenmeyen gruptaki amnion sıvılarında L/S > 2.0, negatif kontrol grubunu oluşturan amnion sıvılarında ise L/S < 2.0 olarak bulundu. Elde edilen sonuçlara göre testin tekrarlanabilir ve güvenilir olduğunu ve RDS'nin prenatal tanısı amacıyla L/S testinin laboratuvanmızda uygulanabileceğini düşünüyoruz.

Key Words: Respiratory distress syndrome, Lecithin / Sphingomyelin ratio, Surfactant, Thin-layer chromatography, Amniotic fluid tests. Researcher: Zeynep TOKGÖZ Respiratory distress syndrome (RDS) is a disease shown in the deficiency of the pulmonary surfactant. The risk factors of the syndrome are diabetes mellitus, hypotension, the risk of delivery, caesarean section. The prenatal diagnosis of RDS is particularly important for the pregnant having the risk factors. Lecithin/Sphingomyelin ratio is commonly used for the diagnosis of RDS. The aim of this study is to adaptate the test to our laboratory. Thin-layer chromatography (TLC) is a chromatographic tecnique, is used for the determination of the L/S ratio. The steps of the test are; The extraction of the lipids from the amniotic fluid, The separation of the phospholipids on the silica gel, The coloration of the bands with cupric asetat, The dansitometric analysis of the lecithin sphingomyelin bands. The study group consisted of 22 amniotic fluids obtained from vaginal and transabdominal ways.The control group was constructed by two different subgroups: positive amniotic fluids taken from vaginal way and known as clinically non-RDS. Negative group containing the amniotic fluids taken from transabdominal way in the week 16 of the pregnancy. Coefficient variations of the test are: Positive control: shake test; positive, standart deviation (SD) = 0.05, intraassay coefficient variation (CV) = %2. Negative control: shake test; negative, standart deviation (SD) = 0.05, intraassay coefficient variation (CV) = %4.2. Interassay coefficient variation (CV) =0.03.The rate of L/S was found higher than 2.0 in the non-RDS amniotic fluids. The rate of L/S was found less than 2.0 in the negative control group. Our results show that the test is reliable and repeatable. The rate of L/S can be used for the prenatal diagnosis of RDS in our laboratory.