İnvaziv duktal meme kanserlerinde ß-catenin`in karsinognik süreçte önemli görülen N-ucu mutasyonlarının araştırılması

Abstract

2 ÖZET Beta-catenin, sinyal iletisinde ve hücre adezyonunda önemli rolü olan multifonksyonel bir proteindir. İstirahat halindeki normal hücrede, Wnt aktivasyonu yokluğunda, p-catenin hücre membranında adherens bağlantılarda yerleşiktir ve hücre içi serbest sitoplazmik p-catenin düzeyi p-catenin'in ubikitin proteozom yıkılımından dolayı çok düşük düzeydedir. Wnt sinyal yokluğunda GSK3p, p-catenin'i N-ucunda yer alan serin ve threonin amino asitlerinden (kodon 33, 37, 41, 45) fosfatlamaktadır. N-ucu serin ve threonin amino asitlerinin fosforilasyonu p-catenin stabilizasyonunu sağlamakta ve stabilize p-catenin nükleusa geçerek hedef genlerin transkripsyonel aktivasyonunu gerçekleştirmektedir. Bu çalışmada, 14 invaziv duktal meme kanseri örneğinde, p-catenin geninin 3, 4, 5 ve 6. eksonlarında (N-ucu) olası somatik mutasyonlar polimeraz zincir reaksiyonu (PCR), tek iplik konformasyon polimorfizmi (SSCP) ve DNA dizi analizi ile araştırılmıştır. İncelenen örneklerde, bu bölge için p-catenin mutasyonu saptanmamıştır, p-catenin proteininin hücre kompartımanlarında birikimi bağlantılı diğer bir araştırmada immünhistokimya yöntemi ile belirlenmiştir. Bu sonuçlar, invaziv duktal meme kanserinde p-catenin'in genetik defektinin nadir olduğunu ve Wnt sinyal yolağını oluşturan diğer elemanların mutasyonlarının incelenmesinin önemli olabileceğini göstermiştir.

3 SUMMARY Beta-catenin is a multifunctional protein playing an important role in cellular adhesion and signal transduction. In normal resting cells in the absence of Wnt activation, p-catenin is localized to the adherence junctions on the cell membrane and free cytoplasmic p-catenin is rapidly destroyed by ubiquitin proteasome degradation pathway. In the absence of Wnt signalling, GSK-3P phosphorylates p- catenin at critical serine and threonine amino acids (codons 33, 37, 41, 45) located at the N-terminus. Phosphorylation of serine-threonine residues in N-terminus of p- catenin results in stabilization, cytoplasmic and nuclear accumulation of p-catenin, and subsequent transcriptional activation of putative target genes. In this study we investigated 14 human invasive ductal breast cancer samples for somatic mutations in the exons 3, 4, 5 and 6 of p-catenin gene (N-terminal region) by the combined use of polymerase chain reaction (PCR), single strand conformation polymorphism (SSCP) and sequencing. No p-catenin mutation was detected in any of these tumors. Accumulation of aberrant p-catenin protein in cellular compartments in the same breast cancer samples was confirmed with a related experiment by immunohistochemical methods. Our results suggest that genetic defects in p-catenin is not common in invasive ductal breast cancers, whereas mutations in other components of the Wnt signaling pathway should be considered.