Staphylococcus aureus üzerine Vankomisinin subminimal inhibitör konsantrasyon ve minimal inhibitör konsantrasyonlarda virulansa etkisi

Abstract

Amaç vankomisinin Staphylococcus aureus ATCC 25923'ün virulansını nasıl etkilediğini gözlemlemektir. Virulans faktörleri değerlendirilirken vankomisinin minimum inhibitör konsantrasyonun (MİK) üst değerleri (supra-MİK), MİK değerleri ve sub-MİK değerlerinde, yumurtalı besiyeriyle lipaz, yağsız süt tozlu besiyeriyle proteaz, %5 koyun kanlı besiyeriyle hemoliz özellikleri incelenmiştir. Tüp koagülaz yöntemiyle salınan koagülaz, lam koagülaz yöntemiyle bağlı koagülaza ve lateks aglutinasyon ile protein A ve kümeleştirici faktörün (?clumping factor?) varlığına bakılmıştır. Biyofilm oluşumu kristal viyole yöntemi ile incelenmiştir.Mikrodilusyon yöntemi ile Staphylococcus aureus ATCC 25923 için vankomisinin en düşük baskılayıcı yoğunluğu (MİK'i, minimal inhibisyon konsantrasyonu) 1µg/ml bulunmuştur. . Proteaz supra-MİK, MİK ve sub-MİK'lerde pozitif gözlenmiştir. Hemoliz supra-MİK, MİK ve sub-MİK'lerde pozitif gözlenmiştir. Lam koagülaz vankomisinin MİK(1µg/ml), %50 MİK (0,5 µg/ml), %25 MİK (0,25 µg/ml) ve %12,5 MİK (0,125 µg/ml) değerlerinde pozitif bulunmuştur. Lateks aglutinasyon %50 MİK (0,5 µg/ml), %25 MİK (0,25 µg/ml) ve %12,5 MİK (0,125 µg/ml) değerlerinde pozitif bulunmuştur. Tüp koagulaz %50 MİK (0,5 µg/ml), %25 MİK (0,25 µg/ml) ve %12,5 MİK (0,125 µg/ml) değerlerinde 2. saatten itibaren pozitif bulunmuştur. Biyofilm %50 MİK (0,5 µg/ml), %25 MİK (0,25 µg/ml) ve %12,5 MİK (0,125 µg/ml) değerlerinde pozitif bulunmuştur.Çalışmamızda, Staphylococcus aureus'un mikroçevre koşullarını oluşturan vankomisinin varlığında, bakterinin davranışlarının (fizyopatolojisinin) değişmediği gözlemlenmiştir. Vankomisinin kullanmanın ?son çare olduğu? klinik durumlarda vankomisin konsantrasyonlarında Staphylococcus aureus' un üremesi, bakteri virülansının etkilenmeyeceğini göstermektedir. Buna bağlı olarak vankomisinin bakterinin davranışlarını genotipik ve fenotipik olarak etkilemediğini söylemek mümkündür.Anahtar kelimeler: Staphylococcus aureus, vankomisin, eksoenzimler, yüzey proteinleri, biyofilm

The purpose of this study was to observe how vancomycin influences Staphylococcus aureus ATCC 25923?s virulence. Lipases, proteases, hemolysis, slide coagulases, tube coagulases, latex agglutination and biofilm determined as virulance factors. Minimal inhibitory concentration (MIC) of vancomycin against Staphylococcus aureus ATCC 25923 was detected by broth microdilution method. Than production of Stapylococcus aureus lipases, proteases, biofilm, coagulases and latex agglutination tests were checked under sub-MIC and supra-MIC of vancomycin. Lipases were observed on medium with egg-yolk and proteases observed on medium with skim milk. Hemolysis was observed on Colombia agar with %5 sheep blood. Released coagulase was observed by tube coagulase test and attached coagulase was observed by slide coagulase test. Protein A and clumping factor were observed by latex agglutination test. Biofilm production was detected by crystal violet method.Minimal inhibitory concentration (MIC) of vancomycin against Staphylococcus aureus ATCC 25923 was detected 1µg/ml. Slide coagulase were positive under MIC, MIC %50, MIC %25, MIC %12,5 of vancomycin. Latex agglutination were positive under MIC %50, MIC %25, MIC %12,5 of vancomycin. Biofilm were positive under MIC %50, MIC %25, MIC %12,5 of vancomycin. Under MIC %50, MIC %25, MIC %12,5 of vancomycin concentrations tube coagulase became positive at second hour. After 24 hour incubation at 36°C lipase, protease and hemolysis were positive from MIC, MIC %50, MIC %25, MIC %12,5 of vancomycin.Staphylococcus aureus ATCC 25923 conserved production of lipase, protease and hemolysis after exposed to vancomycin. In our study, behaviour and physiopathology of Staphylococcus aureus didn?t change by microenviroment conditions with vancomycin.Key words : Staphylococcus aureus, vancomycin, exoenzymes, surface proteins, biofilm