İnsan pankreas ve tükürük alfa-amilazının saflaştırılması, kinetik özelliklerinin incelenmesi ve bazı mikroorganizmalara etkisinin araştırılması

Abstract

ÖZET Bu çalışmada insan tükürük ve pankreas materyalinden aseton, amonyum sülfat presipitasyon, iyon değişimi ve jel filtrasyon metotlarıyla saflaştınlan amilazın bazı fizikokimyasal ve kinetik özellikleri incelenmiştir. Ayrıca bu izoenzimlerin bazı mikroorganizmalara etkileri araştırılmıştır. Saflaştırılan izoenzimlerde, çözünür nişasta için Michaelis-Menten ve Line- weaver-Burk grafikleri çizilerek Km değerleri S-tipi a-amilaz için 1.69, P-tipi cc-amilaz için 1.17 bulunmuştur. Daha sonra pH, deney sıcaklığı, belli sürelerde- ki bekletme sıcaklığının ve effektör olarak maltoz ve kafeinin enzim aktivitesine etkisi incelenmiştir. S-tipi a-amilaz için maksimum aktivitenin pH 6.9'de P-tipi a-amilaz için 7.9'de olduğu bulunmuştur. Optimum aktivite her iki izoenzim için 37°C'de elde edilmiştir. Ayrıca 65°C'de S-tipi a-amilazın P-tipine göre ısıya daha dayanıklı ol duğu bulunmuştur. Maltozun her iki izoenzime inhibitor etki yaptığı, ancak en yüksek inhibis- yon konsantrasyonunun S-tipi a-amilaz için 3mM; P-tipi a-amilaz için 4mM oldu ğu görülmüştür. 0.5-1 OmM arasındaki kafein konsantrasyonu ise S-tipi a-amilazı P-tipine göre daha yüksek oranda inhibe etmektedir. Amilaz izoenzimlerinin, Salmonella, p-Hemolitik Sreptococ, Candida, Stap- hilococcus aureus, Pseudomonas aueroginosa mikroorganizmalarının kültürdeki üremeler üzerine etkileri olmadığı gözlenmiştir.

SUMMARY This study was performed on amylase which was purified from human sali va (S-type) and pancreatic (P-type) materia! by acetone, ammonium sulfate pre cipitation, ion exchange and gei filtration methods. Some physicochemical and kinetic properties of purified a-amylase were determined, in addition the effect of these isoenzymes on some microorganisims were examined. Soluble starch was used to plot Michaelis-Menten and Lineweaver Burk grafics of a-amylase isoenzymes. Km values for the salivary and pancreatic amylase were 1.69, and 1.17 respectively. Then the effects of pH, reaction tem perature, temperature in certain preincubation times on each isoenzyme's acti vity were studied. Coffein and maltose were olso examined as an effector. While the S-type of a-amylase showed a maximum activity at pH 6.9 this value was 7.9 for the P-type isoamylase. Both enzymes had optimum activities at 37°C. On the other hand S-type a-amylase was found to be more stable than P-type amylase at 65°C. Both isoenzymes were inhibited by maltose, but the maximal inhibiting co- centration of maltose was 3mM for S-type and 4mM for P-type a-amylase. 0.5- 10mM cocentration of coffein had more effective inhibition on S-type than P- type amylase isoenzymes. Amylase isoenzymes had no effect on the growth of Salmonella, p-Hemoli- tik Streptococ, Candida, Staphilococcus aureus, Pseudomonas auroginosa mic roorganisims in cultures.