Köpeklerin konjunktivasında bulunan mast hücrelerinin histokimyasal, enzim histokimyasal ve immunohistokimyasal özellikleri

Abstract

KÖPEKLER N KONJUNKT VASINDA BULUNAN MASTHÜCRELER N N H STOK MYASAL, ENZ M H STOK MYASAL VEMMUNOH STOK MYASAL ÖZELL KLERÖZETGözün biyolojik zırhı olan konjunktiva hem fiziksel bir bariyer olarak tozların, yabancı cisimlerin,mikroorganizmaların göz küresinin arka kısımlarına ulaşarak yangı oluşturmasını engeller, hem detaşıdığı müköz salgı yapan kadeh hücreleri, bezler ve aköz salgı yapan yardımcı gözyaşı bezleri ile gözyaşı filminin mukusunun üretilmesini, korneanın şeffaflığını ve ıslaklığını sağlar. çerdiği mukozaylailişkili lenfoid doku ile de yabancı mikroorganizmaları etkisiz hale getirerek immunolojik savunmadaönemli rol oynar. Konjunktivanın hücresel kompozisyonunu gözün immünitesinde önemli rol oynayanlenfositler, mast hücreleri ve Langerhans hücreleri, diğer dentritik hücreler ile makrofajlar gibi antijensunan hücreler oluşturur. Mast hücreleri de esas olarak mikroorganizmaların vücuda girebildikleriyerlerde bulunduğu için patojenlerle direkt temas kuran ilk yangı hücrelerinden biri olarakdeğerlendirilebilir. Bu çalışma köpeklerin konjunktivasında bulunan mast hücrelerinin histokimyasal,enzim histokimyasal özellikleri ile proteaz aktivitelerini belirleyerek fizyolojik koşullarda mast hücrepopulasyonunun heterojenitesini ortaya koymak amacıyla yapılan bu çalışma 10 adet gözleri sağlıklıköpek kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Köpeklerde normal konjunktivadaki mast hücrelerininformalin duyarlılıklarına göre formalin duyarlı ve dirençli olmak üzere iki alt tipe ayrıldıkları vemetokromazi gösterdikleri saptanmıştır. Alcian blue-safranin O katyonik boya kombinasyonundamast hücrelerinin alcian blue pozitif, safranin O pozitif ve alcian blue-safranin O pozitif olmak üzere üçtip granül içerdiği belirlenmiştir. Mast hücreleri granüllerindeki proteoglikanlarının kritik elektrolitkonsantrasyonlarına göre de iki alt tipe ayrılmıştır (CEC 0.2/0.3 molar ve 0.7/0.8 molar). Masthücrelerinin proteoglikan ve proteaz içeriklerinin bir arada gösterilmesinin mümkün olabileceğidüşüncesinden yola çıkarak Naphtol AS-D chloroasetate esterase boyama tekniği ardından daproteglikanları belirlemek için 0.2/0.3 M'lık CEC veya 0.7/0.8 M'lık CEC boyama tekniği ilk kez buçalışmada uygulanmıştır. NASDCA-CEC boyamasında sadece kimaz içeren (NASDCA pozitif) hücreler,kimaz ile proteoglikanları birlikte içeren mikst hücreler ve sadece proteoglikan içeren (CEC pozitif)hücreler olmak üzere üç mast hücresi alt tipi ayırt edilmiştir.Proteaz içeriklerine göre de kimaz pozitif ve triptaz pozitif olmak üzere iki hücre tipi tanımlanmıştır.Triptaz hariç tüm boyamaların formalin tespitinden etkilendiği, yani Carnoy solüsyonunun granüllerdekiproteoglikan ve proteaz içeriğini koruyarak mast hücrelerinin boyanma özelliklerini bozmadığıbelirlenmiştir.Sonuç olarak köpeğin konjunktivasında bulunan mast hücreleri formalin duyarlılığına, katyonik boyalarlaboyanma özelliklerine, granüllerindeki proteoglikanlara ve proteazlara göre farklılıklar gösteren heterojennitelikli hücreler olduğu belirlenmiştir. Bu özellikleri de özellikle konjunktival hastalıklarınpatogenezisinin belirlenmesinde bir kriter olarak kullanılabilir.Anahtar kelimeler: Köpek, Konjunktiva, Mast Hücreleri, Histokimya, Enzimhistokimya,mmunohistokimya

HISTOCHEMICAL, ENZYM HISTOCHEMICAL ANDIMMUNOHISTOCHEMICAL CHARACTERIZATION OFMAST CELLS IN DOG?S CONJUNCTIVAABSTRACTThe conjunctiva that is a biological armor for eye is both prevent to foreign matters to be inflammation toeye ball?s backside as a barrier and produce the mucin, to manufacture mucus of tear film of eye or toprovide transparency and wetness of cornea with its goblet cell to be produced mucous secretion, theglands and the accessory tear glands to be made aquous secretion. It also play a important role forimmunological defence with its contain mucosa associated lymphoid tissue, deactivating the foreignmicroorganisms. The cellular composition of eye consist of lypmhocytes, mast cells, Langerhan?s cellsand antigen presenting cells such as other dendritic cells and like macrophages, playing a important rolefor immunity of eye. It is evaluated that mast cells are first inflammation cells which could be directlycontacted to pathogens where it is located place, entering microorganisms to body.This study was carried out to manifest the heterogeneity of mast cells populations in physiologicalconditions, determining the properties of histochemical and enzym histochemical and activity of protease,using ten dogs which has healthy eyes. In dogs, the mast cells in normal conjunctiva were found to beformaline sensitive and formaline resistant as sensitivity of formaline and that it were shown themetachromasie. In cationic stains combination of alcian blue-safranin O, it was determined that the mastcells have three types granules as alcian blue positive, safranin O positive and alcian blue-safranin Opositive. The mast cells were divided two subunits according to critcal electrolit concentirations ofproteoglycans in its granules (CEC 0.2/0,3 molar and 0.7/0.8 molar). We thought that it is possible thatproteoglycans and protease contents of the mast cells were demonstrated together. Thus, in study wecarried out firstly to determine the proteoglycans for CEC 0.2/0.3 molar or 0.7/0.8 molar CEC stains afterNaphtol AS-D chloroasetate staining method. In NASDCA-CEC staining, it was determined that mastcells had three subunits as the cells only contained chymase (NASDCA cells), the mix cells containedchymase and proteoglycans together and the cells only contained proteoglycans (CEC positive cells).According to protease contents two cells types were described as chymase positive and tryptase positive.Except for tryptase staining, other staining were effected by formaline fixation, that is, it was determinedthat the Carnoy fixation was not damaged to staining properties of mast cells, protecting the contents ofproteoglycans and protease in its granules.Consequently, the mast cells in conjunctiva of dogs were cells heterogenic qualified shown to disparityaccording to the sensitivity of formaline, the staining properties with cationic dyes and proteoglycans andproteases in its granules. Thoose properties might utilize to determine the pathogenesis of conjunctivaldiseases as a criteriaon.Key words: Dog, Conjunktiva, Mast Cells, Histochemistry, Enzym Histochemistry,Immunohistochemistry.