Sistein türevlerinin tat (transkripsiyon transaktivatörü) aktivitesi üzerindeki etkilerinin araştırılması

Abstract

İnsan immün yetmezlik virüsü (HIV), kazanılmış bağışıklık yetmezliği sendromunun (AIDS) temel etkenidir. AIDS 1981'de ilk olarak gözlendiğinden beri, dünyanın dört bir yanındaki değişik bölgelerde aralıksız olarak yayılmaktadır. Uygun tedavi yaklaşımı henüz bulunamamıştır.HIV yapısal genlerin dışında regülatör genleri taşır. Bunlardan en önemlisi transkripsiyon transaktivatörüdür. Tat-protein, virüsün yapısal proteinlerinin ekspresyonunu sağlar. Ayrıca virüsün patolojik etkisinde önemli bir yer teşkil eder. Bu nedenle Tat fonksiyonunun bloke edilmesi veya Tat-proteininin ekspresyonunun durdurulması, HIV replikasyonunun inhibe edilmesine ve virüsün patolojik etkilerinin en aza indirilmesine yol açacaktır.Bu çalışmada, Tat-proteininin fonksiyonunu durduracak sistein türevleri denenmiştir. Bu maddelerin Tat-proteini aktivitesi üzerine etkileri hücre kültüründe araştırılmıştır. Bu araştırmalarda Jurkat hücreleri kullanılmıştır. Jurkat hücreleri iki farklı plazmit ile transfekte edilmiştir. Plazmitlerin kaliteleri agaroz jel elektroforezi ile test edilip görüntülenmiştir. Transfeksiyon yapılan hücrelerde inhibitörler ilk olarak tek dozda (50 µg/ml) denenmiş ve hücrelerde CAT ELISA kiti ile CAT (Kloramfenikol Asetil Transferaz) ekspresyonu tesbit edilmiştir. Bu dozda inhibisyon oluşturan inhibitörlerin dozları arttırılarak (50 µg/ml, 75 µg/ml, 100 µg/ml) tekrar denenmiştir.50 µg/ml dozda inhibisyon gözlenen aminoasit türevleri, L-sistein metil ester hidroklorid ve L-sistein S-sülfat`tır. Bu dizilerde inhibisyon olduğu ancak bu inhibisyonun doza bağımlı olmadığı, L-sistein metil ester hidroklorid'in CAT aktivasyonunu en iyi inhibe ettiği dozun 75 µg/ml, L-sistein S-sülfat'ın CAT aktivasyonunu en iyi inhibe ettiği dozun ise 50 µg/ml olduğu saptanmıştır.Sonuç olarak, ''L-sistein metil ester hidroklorid'' ve ''L-sistein S-sülfat'' aminoasit türevlerinin, HIV 'in replikasyonunu aktive eden Tat üzerinde inhibe edici etkilerinin olduğu bu çalışma ile gösterilmiştir. Çalışma bu nedenle HIV'e karşı geliştirilecek inhibitörler açısından oldukça önemlidir.Anahtar Kelimeler: AIDS, HIV, Tat-protein, Sistein türevleri

Human immunodeficiency virus (HIV) is the main factor of acquired immuno deficiency syndrome (AIDS). Since the world first became aware of AIDS in 1981, the disease is spreading continuously in various regions around the globe. Appropriate treatment approaches still have not been discovered.HIV contain the genes namely regulator genes, in addition to the structural ones. The most crucial regulator gene is transactivator of transcription. Tat-protein provides the expression of the structural proteins. Besides that function, it has important roles in the pathogenesis of the virus. For this reason, blocking the Tat function or the expression of this protein would inhibit the replication of the HIV and reduce the pathological effects of the HIV.In this project, cysteine derivatives that could inhibit the function of this Tat-protein were tried. The effects of this substances on the activity of Tat-protein were investigated in cell cultures. In this study we used the Jurkat cells. The Jurkat cells were transfected by two different plasmids. The qualities of the plasmids were monitorized and tested on agarose jel. In the transfected cells, the inhibitors were initially tried in one dose (50 µg/ml) and the CAT (Chloramphenicol Acetyl Transferase) expressions were analyzed by the help of CAT ELISA kit. The inhibitors that were decided to be effective in this dose, were then prepared in three different doses (50 µg/ml, 75 µg/ml, 100 µg/ml).The amino acid sequences that has inhibitor effects in 50 µg/ml dose were L-cysteine methyl ester hydrochloride and L-cysteine S-sulphate and their inhibition were not dose dependent. The best inhibitor dose of the L-cysteine methyl ester hydrochloride on CAT expression was 75 µg/ml and it was 50 µg/ml for the L-cysteine S-sulphate.In conclusion, it was shown that, the inhibitor effects of amino acid derivatives ''L-cysteine methyl ester hydrochloride?' and '`L-cysteine S-sulphate?' have inhibitor activity on the Tat, which activate the HIV replication were shown in this study. Therefore, this study is very important from the point of development of new inhibitors for HIV infection.Key words: AIDS, HIV, TAT-protein, cysteine derivatives