Bazı meyva sularında apokarbonik anhidrazın tekrar aktifleştirilmesiyle Zn+2 tayini

Abstract

11 ÖZET Bu çalışmada, bazı vücut sıvılarında iz miktarda bulunan Zn+2 'nin kantitatif tayini için geliştirilen enzimatik bir yöntem, modifiye edilerek bazı meyva sularına uygulanmıştır. Apokarbonik anhidrazın enzimatik aktivitesini çözeltideki Zn+2 miktarıyla orantılı olarak tekrar kazanması, enzimatik yöntemin temel prensibini oluşturmuştur. Önce, sığır karbonik anhidraz enzimi, eritrosit hemolizatından afinite kromatografisi ile saflaştırıldı. Saflaştırılmış enzim piridin-2,6-dikarboksilik asit çözeltisine karşı diyaliz edilmek suretiyle enzime bağlı Zn+2 'nin tamamı uzaklaştırıldı. Böylece %100 saflıkta apoenzim elde edildi. Önce meyva suyu numunelerinde Zn+2 tayini enzimatik yöntemle yapıldı. Daha sonra, aynı numunelerin atomik absorbsiyonla da Zn+2 miktarı ölçüldü. Çalışılan kivi, erik, şeftali ve dut meyva suyu numuneleri için apokarbonik anhidraz yöntemiyle bulunan X ± SD değerleri sırasıyla, 1,764 ± 0,066, 2,757±0,341, 3,405 ± 0,463ve 1,342 ± 0,097 ppm'dir. Aynı sırayla atomik absorbsiyonla ölçülen Zn+2 değerleri ise; 2,533, 2,789, 3,128 ve 1,034 ppm'dir. Bu sonuçlara göre istatistiki analiz yapılarak enzimatik yöntemin erik ve şeftali için uygulanabileceği, kivi ve dut için uygun olmadığı anlaşılmıştır. Metodun diğer meyvalara da uygulanması önerilebilir. i

Ill SUMMARY In this study, to determine the zinc found in trace amount in some body fluids, a new enzymatic method with some modifications has been applied to some fruit juices. The main principle of enzymatic method is that apocarbonic anhydrase regains its activity with Zn+2 existed in the solution proportionally. Thus the higher the Zn+2 concentration in the solution, the more activated the enzyme in the medium. For this purpose, bovine carbonic anhydrase was purified from eryhrocyte hemolysate using the method of affinity chromatography. The Zn+2 bound to enzyme was removed by using dialysis of purified enzyme against the solution of pyridine-2,6-dicarboxylic acid. Thus, %100 purified enzyme was produced. First, the determination of Zn+2 in the samples of fruit juices was made by enzymatic method. Then, the content of Zn+2 in the same samples was measured by atomic absorption. X ± SD values resulting from apocarbonic anhydrase method for kiwi, plumb, peach, and mulberry are 1,764 ± 0,066, 2,757 ± 0,341, 3,405 ± 0,463and 1,342 ± 0,097 ppm, respectively. The values of Zn+2 measured by atomic absorption for the same fruits are 2,533, 2,789, 3,128 and 1,034 ppm, respectively. According to the results of statistical analysis, it is understood that this enzymatic method can be used for peach and plump, but it can not be used for kiwi and mulberry. It may also be suggested to apply this method for other fruits.