Nöral dokulardan gangliozid izolasyonu

Abstract

İÜ ÖZET Yüksek Lisans Tezi NÖRAL DOKULARDAN GANGLİOZİD İZOLASYONU Nuri Yİ?İT Ankara Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Biyoloji Anabilim Dalı Danışman : Prof. Dr. Sevinç KAROL 1989, Sayfa: 30 Jüri : Prof. Dr. Sevinç KAROL Doç. Dr. Zekiye SULUDERE Doç. Dr. Cevat AYVALI Bu çalışmada nöral dokulardan gangliozid izolasyonu ve izolasyon işleminin opti mum dizaynı araştırılmıştır. Dana, koyun ve kuzu beyinleri materyal olarak kullanıla rak, beyinler, kloroform/metanol (2 : 1) karışımından homojenize edilmiştir. Homoje- nat filtre edilmiş ve %20 oranında saf su eklenecek üst faz ayrımı başarılmış, ayrılan üst faz DEAE Sephadeks A-25 kolonundan geçirilmiştir. Farklı konsantrasyonlarda amonyumformat içeren, kloroform/metanol/ amonyumformattan oluşmuş, toplama çö zeltilerinin kolondan geçirilmesiyle mono, di, trisiyalogangliozidler toplanmıştır. Elde edilen gangliozidler ince tabaka kromatografisiyle incelenmiş ve rezorsinol ayıracıyla renklendirilmiştir. Gangliozid miktarları spektrofotometrik olarak hesaplanmıştır. Hücre kültürlerinde kullanabilmek için gangliozidler diyaliz ve filtrasyonla safiaştı- nlmış ve 2,5 m rad'lık gama radyasyonuyla sterilizasyonları yapılmıştır. Araştırmada 100 gr kuzu beyninden 25.7 jig /İt total gangliozid elde edilmiştir. Elde edilen ganglio zid tipleri monosiyalogangliozid : 6.4 Aig/lt, disiyalogangliozid : 4.1 pg/lt ve trisiyalo- gangliozid : 5.6 jıg/lt olacak şekilde aynştınlabilmiştir. Diyaliz ve filtrasyonun büyük oranda gangliozid kaybına yol açtığı belirlenmiştir. Gama radyasyonuyla yapılan çalış mada ise herhangi bir kayıp olmamıştır. ANAHTAR KELİMELER : Gangliozid izolasyonu, kolon kromatografisi, ince taba ka kromatografisi, rezorsinol reaksiyonu, gama sterili- zasyonu.

iv ABSTRACT Masters Thesis ISOLATION GANGLIOSIDES FROM NEURAL TISSUES Nuri Yİ?İT Ankara University Graduate School of Natural and Applied Sciences Department of Biology Supervisor : Prof.Dr. Sevinç KAROL 1989, Page: 30 Jury : Prof.Dr.Sevinç KAROL Doç. Dr. Zekiye SULUDERE Doç.Dr. Cevat AYVALI In this study; Gangliosides were isolated from neural tissues and the optimum de sign of isolation procedure was investigated. Bovine, sheep and lamb brains were used as material. These were homogenized in a chloroform/methanol (2:1) mixture. The ho- mogenat was filtrated and phase separation was achieved by adding 20 % distilled wa ter. The upper phase was applied to DEAE Sephadex A-25 column. Gangliosides were elu ted by chloroform/methanol/amoniumformate solution. By adding different con centration of amoniumformate to this solution mono, di, trisiyalogangliosides were col lected. Gangliosides were analysed by thin-layer chromatography and visualized by re- sorcinol reagent. Gangliosides were quantified by spectrophoto metrical measurement and purified by dialysis and filtration then sterilized under 2,5 m rad gamma irradiati on in order to use in tissues culture system. From 100 g of tissue it was possible to obtain 25.7 Jig/It total gangliosides. The con centration of mono, di, trisialo gangliosides were 6.4 Jig/It, 4.1 jag/lt and 5,6 jug/It res pectively. Dialysis and filtration caused a marked reduction in ganglioside concentration. Ho wever gamma sterilization didn't cause any reduction. KEYWORDS : Isolation of gangliosides, column chromatography, thin-layer chro matography, resorcinol reaction, gamma sterilization.