Protoplast füzyonu yolu ile bacillus thuringiensis suşlarının özelliklerinin geliştirilmesi üzerinde araştırmalar

Abstract

îi ö Z E T Doktora Tezi PROTOPLAST FUZYGNU YOLU İLE BACILLUS TMJRINGIENSIS SUŞLARININ ÖZELLİKLHltNtN GELİŞTİRİLMESİ ÜZERİNDE ARAST IHMALAR Gönlil WHWEZ (ÇKTtNKAYA) Ankara üniversitesi Fen HU imleri EnstitUsU Gıda Bilimi vo Teknolojisi Anabilin» Dalı Dnnışman j Prof.Dr. M. LUtfU ÇAKMAKÇI 1990, Sayfa: 68 JUri: Prof.Dr. M.LUtfU Çakmakçı Prof.Dr. Sevinç Karol Doç. Dr. Emir Can Sunar Bu çalışmada, TUB ÎTAK-Tar unsal Mikrobiyoloji (TATMİK) (Jnitesince desteklenen projelerde elde edilen entoaopatojen Bacillus türleri kullanılmıştır. însektisîdal aktiviteye sahip kristal olısş turan ve oluştur mayan bu suşlardan çeşitli besinsel gereksinimleri olan oksotrofik, antibiyotiklere dirençli, sporsuz kristalsiz ve sporlu kristalsiz ınutant suşlar elde edilmiştir. Denemede kullanılan suşlar m protoplast larının hazırlanmasında 20 mg/ml konsantrasyonunda lizozim enzimi kullanılmıştır. Protoplast fUzyonu, % 90-93 oranında protoplast oluştuğunda yapılmıştır. Daha yüksek lizozim konsantras yonlarında yüzde protoplast oranı artmış ancak rejenerasyon oranında azalma olduğu gözlenmiştir. Rejenerasyon ortamı olarak 0.25 M Sodyum sliksinat içeren DM3 ortamı kullanılmıştır. Bu ortamda rejenerasyon oranının % 0-4 olduğu ancak Pol let ilen glikol (PEG) ilâvesinin rejenerasyon oranını azalttığı bel irlenmiştir* Füzyon çalışmaları biyokimyasal karakterleri, doğal antibiyotik dirençleri, oksotrofik özellikleri yanında sporlarına ve kristal oluşunu bakımından farklılık gösteren suşlar arasında yapılmıştır. Bsmatk yanında iki antibiyotiğe dirençli Escherichia col i pGS9 (kanamsin ve kloramfe- nikol) ile kristal oluşturan Bacillus thuringiensis susunun total DNA' lan izole edilerek protoplastlara transforms edilme olasılığı araştırılmıştır. Sonuçta, E. cali pGS9 susunun taşıdığı antibiyotik dirençli- lik özellisinin 0. thuringitmsis protoplast larına Gitarı Idığı, buna karşın stabil kalmadığı belirlenmiştir. ANAHTAR KELİMELER: Protoplast füzyonu, Bacillus thuringiensis, Doğal antibiyotik dirençliliği, oksotrofik

İÜ ABSTRACT Ph. D. Thesis STUDIES ON THE DEVELOPMENT OP THE aiARACTERISTICS OF « mCILUIS THllRrNGlBTISIS STRAINS BY PROTOPLAST FUSION GÖnUl DÖNMEZ (ÇETİNKAYA) Ankara University Graduate School of Natural and Applied Sciences Department of Food Science and Technology Supervisor t Prof.Dr. M.LUtfU ÇAKMAKÇI 1900, Paget 60 Jury l Prof.Dr. M.LUtfU Çakmakçı Prof.Dr. Sevinç Karol Assoc. Prof.Dr. Emir Can Sunar In this study, some entomopathogenic Bacillus strains which were originated in TÜBİTAK Agricultural Microbiology Research Unit (TARMIK) projects, were used. Some auxotrophs, antibiotic resistant, asporogenous and aerystaliiferous» sporogenous and aerystaliiferous mutant strains were obtained from these itisecticidal active, crystal 1 iferous and acrystaliiferous strains. In addition, lysozyme for the preparation of protoplast cultures of strains was used as 20 mg per ml* Protoplast fusion was carried out using two different strains. Generally, protoplast ratio was changed between 90-93 %. This ratio increased with increased lysozyme concentration but regeneration ratio decreased with increasing enzyme concentration. 0.25 M Na-Succinate containing DM3 medium was used as regeneration medium. During these experiments regeneration ratio was changed between 0-4 %. Polyethylene glycol (PEG) application decreased the ratio of regeneration. Fusion experiments were performed between biochemically, intrinsic antibiotic resistance characteristics, auxotrophlcally,sporulation and crystal formation different mutants. Beside that, fusion studies were carried out between kanamycin and chloramphenicol resistant Escherichia coll pGS9 and crystal! i ferous Bacillus thurlngiensis 'S isolated DNA. As a result, antibiotic resistant characteristics of E.coli pGS9 were transformed to B, thurlngiensis protoplasts but this recombined strains were not stable. KEY WORDS: Protoplasts fusion, Bacillus thuringiensis, intrinsic antibiotic resistance, auxotrophic mutant.