Karbonik anhidraz enziminin farklı destek materyalleri üzerine immobilizasyonunun araştırılması

Abstract

OZFT Y. Lisans Tezi KARBONİK ANHİDRAZ ENZİMİNİN FARKLI DESTEK MATERYALLERİ ÜZERİNE İMMOBİLİZASYONUNUN ARAŞTIRILMASI Azize ALAYLI Atatürk Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Kimya Anabilim Dalı Danışman : Doç. Dr. Nazan DEMİR Çalışmamız da karbonik anhidraz enzimini farklı destek dokulara immobilize edilmesi ve immobilize karbonik anhidraz enziminin özelliklerinin incelemesi amaçlandı. Karbonik anhidraz (CA: Karbonat hidroliyaz: E.C. 4.2.1.1) enzimi sığır eritrositlerinden afinite kromatografısi kullanılarak saflaştırıldı. Saflaştırılmış enziminin esteraz ve hidrataz aktiviteleri belirlendi. Enzimin saflığının kontrolü SDS-PAGE elektroforezi ile yapıldı. Bu işlemlerden sonra immobilizasyon çalışmalarına başlandı. İmmobilizasyon işlemi esnasında destek materyali olarak aktif karbon ve Balkaya kömürü kullanıldı. Uygulanan metod adsorbtif immobilizasyon tekniği esasına dayanır. Bu nedenlerden dolayı ilk olarak immobilize enzimi ve destek materyalini ve dolayısı ile immobilizasyonu etkileyecek optimum şartların belirlemesine çalışıldı. Kullanılan desjek materyallerinin içinde en iyi immobilizasyonun aktif karbona olduğu anlaşıldı. İmmobilizasypndan sonra, Balkaya kömürü ve metillenmiş Balkaya kömürü üzerine immobilize CA'nın esteraz aktivitesi arttı. İmmobilizasyon için Tris-S04 ve Hepes tampon çözeltileri tercih edildi ve bu tampolar da pH:6, pH:7 ve pM:8'de çalışıldı. 2002, 74 sayfa Anahtar kelimeler: Enzim immobilizasyonu, Karbonik anhidraz, Balkaya kömürü, Aktif karbon, Zeta potansiyeli.

ABSTRACT Master Thesis RESEARCH OF IMMOBILIZATION OF CARBONIC ANHYDRASE ON DIFFERENT SUPPORT MATERIALS Azize ALAYLI Atatürk University Graduate School of Natural and Applied Sciences Department of Chemistry Supervisor : Assoc. Prof. Dr. Nazan DEMİR In this study, we aimed to immobilize carbonic anhydrase enzyme on a new type different support material and determine the properties of the immobilized enzyme. Carbonic anhydrase (CA: Carbonate hydro lyase: E.C. 4.2.1.1) was purified from bovine erythrocytes by affinity chromatography. The hydratase and esterase activities of purified enzyme were studied. The purity of the enzyme was controled by SDS-PAGE electrophoresis. Then immobilization studies were performed. In immobilization studies, Balkaya coal and Active charcoal were used as immobilization support ' materials. Method that we used was based on adsorbtive immobilization technics. Therefore, first of all we examined optimum condition which was effect immobilization and endurance of immobilize enzyme on support materials. The best immobilization in the used support materials was found on active charcoal. After the immobilization, esterase activity of immobilized CA on Balkaya coal and methyl-Balkaya coal increased. Tris-S04 and Hepes were refered buffers for immobilization and determined pH for these buffers was pH:6, pH:7 and pH:8. 2002,74 pages Keywords: Immobilization of enzymes, Carbonic anhydrase, Balkaya coal, Active charcoal, Zeta potential.