Agrobacterium tumefaciens aracılığıyla nohut geveni (Astragalus cicer L.)`ne gen aktarımı

Abstract

ÖZET Yüksek Lisans Tezi Agrobacterium tumefaciens ARACILIĞIYLA NOHUT GEVENÎ {Astragalus cicer L.)'NE GEN AKTARIMI Derya GÜRLEK Ankara Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Tarla Bitkileri Anabilim Dalı Danışman: Prof. Dr. Sebahattin ÖZCAN Bu çalışmanın amacı, nohut gevenine (Astragaus cicer L.) A. tumefaciens aracılığıyla gen aktarımı yönteminin geliştirilmesidir. Öncelikle adventif sürgün rejenerasyon oranını yükseltmek için, in v/fro'da hipokotil ve kotiledon eksplantları değişik oranlarda bitki büyüme düzenleyicileri (BAP, kinetin, TDZ ve IBA) içeren MS besin ortamlarında kültüre alınmıştır. Araştırma sonuçlarına göre, en yüksek indirek adventif sürgün rejenerasyon oranı (%53.3) ve eksplant başına sürgün sayısı (3.3), 1.0-2.0 mg/1 BAP ve 0.2 mg/1 IBA içeren MS besin ortamında ve hipokotil eksplantlanndan elde edilmiştir. Gen aktarımı çalışmalarında, pAoPRl GUS-INT, pPRla GUS ve p35S GUS-INT vektörlerini içeren 2260 A. tumefaciens hatları ile hipokotil eksplantları değişik inokulasyon ve ko- kültivasyon metotlarıyla inoküle ve ko-kültive edilmiştir. Araştırma sonuçlarına göre, tüm bakteri hatları için, en uygun inokulasyon süresinin 30 dk, ko-kültivasyon süresinin 48 saat ve en uygun ko-kültivasyon ortam fazının ise sıvı rejenerasyon ortamı olduğu belirlenmiştir. Seçici ortamda gelişen kalluslardan elde edilen sürgünler seçici köklendirme ortamında (1/2 MS + 0.25 mg/1 NAA) köklendirilmiştir. Yapılan histo-kimyasal GUS analizi sonucunda köklenen bitkiciklerin tamamının GUS negatif olduğu görülmüştür. 2006, 56 sayfa Anahtar Kelimeler: Nohut geveni, Astragalus cicer L., biki rejenerasyonu, Agrobacterium tumefaciens, gen aktarımı

ABSTRACT Master Thesis GENETIC TRANSFORMATION OF CICER MILKVETCH (Astragalus cicer L.) via Agrobacterium tumefaciens Derya GÜRLEK University of Ankara Graduate School of Natural and Applied Sciences Department of Field Crops Supervisor: Prof. Dr. Sebahattin ÖZCAN The objective of the study was to improve a Agrobacterium-mediated transformation method for cicer milkvetch (Astragalus cicer L.). Firstly, in order to develop a high frequency of regeneration system, hypocotyls and cotyledon explants were cultured on MS basal medium containing various growth regulators combinations (BAP, kinetin, TDZ and IBA). According to results of the study, the highest adventitious shoot regeneration ratio (53.3%) and number of shoots per explant (3.3) were obtained from hypocotyls on MS media supplemented with 1.0 or 2.0 mg/1 BAP and 0.2 mg/1 IBA. In the genetic transformation studies, hypocotyl explants were inoculated with 2260 Agrobacterium strains harboring pAoPRl GUS-INT, pPRla GUS and p35S GUS-INT plasmids using various inoculation and co-cultivation methods. According to the results of the study; the most suitable inoculation time, co-cultivation time and phase of co- cultivation were determined as Vz hour, 48 hours and liquid regeneration medium, respectively. The shoots developed from calli on selection medium (1/2 MS + 0.25 mg/1 NAA) rooted in the rooting medium. It was observed that the rooted plants did not show GUS gene expression according to histochemical GUS assay carried out. 2006, 56 pages Key Words: Cicer milkvetch, Astragalus cicer L., plant regeneration, Agrobacterium tumefaciens, gene transfer u