Reaksiyon mühendisliği prensipleriyle rekombinant L-fenilalanin üretimi için biyoproses geliştirilmesi

Abstract

Aromatik amino asit yolizinde DAHP sentetaz (gen: aroA) enziminin katalizlediği ilk tepkime ilekorizmat mutaz (gen: aroH) enziminin katalizlediği korizmat'tan prefenat oluşum tepkimelerirekombinant L-fenilalanin üretiminde iki kısıtlayıcı tepkime olarak belirlendiğinden, bu iki konumayönelik olarak rekombinant-Bacillus subtilis ve biyoproses geliştirilmesi araştırma programınıntemel amacıdır. Beş alt-programdan oluşan araştırma programının ilk alt-programındabiyokimyasal reaksiyon mühendisliği teknikleri kullanılarak DAHP sentetaz enziminden sorumluaroA geni, aroH geni içeren ve içermeyen pUC19 E.coli plasmidlerine paralel olarak yapışkan-uçligasyon tepkimesi ile klonlanmış, ardından pMK4 ve pMK4

The reactions catalysed by DAHP sentetase (EC 2.5.1.54) and chorismate mutase (EC 5.4.99.5) inthe L-phenylalanine pathway of Bacillus subtilis were predicted as the rate-limiting steps. Toovercome the limitation of the reactions and to increase the yield and selectivity in L-phenylalanineproduction, by metabolic engineering design and research program, aroA and aroH genesencoding, respectively, DAHP sentetase and chorismate mutase were cloned one by one first ontoan E.coli plasmid. aroA gene was cloned first onto the pUC19 and pUC19