Listeria monocytogenes`in belirlenmesinde minimum inhibisyon konsantrasyonu

Abstract

Bu çalışmada Listeria monocytogenes analizi sırasında PALCAM agar besiyerinde gelişenrefakatçi flora, L. monocytogenes 'in gelişimi etkilenmeden inhibe edilmeye çalışılmış veoluşturulan inhibisyon sistemin de yer aldığı ön zenginleştirme, selektif zenginleştirme veselektif katı besiyerleri geliştirilmiştir. Bu çalışma 4 aşamada tamamlanmıştır.Bu amaçla çalışmanın birinci aşamasında çeşitli gıdalarda ISO 11290-1 yöntemine göre L.monocytogenes analizi yapılmış ve PALCAM agarda gelişen 107 mikroorganizma izole ediliptanımlanmıştır. Analizin son aşamasında katı besiyerinden izole edilen 66 mikroorganizmaseçilip çalışmada kullanılmıştır. Tanımlanan 66 izolatın 14'ü L. monocytogenes, 27'si Listeriaspp., 11'i Bacillus spp., 6'sı Enterococcus faecalis, 3'ü Staphylococcus spp., 4'ü Maya ve 1'i detanımlanamayan Gram pozitif çubuk bakteridir.Çalışmanın ikinci aşamasında refakatçi bakterinin inhibisyonu için LiCl, seftazidim,moksalaktam, amfoterisin B, nalidiksik asit, polimiksin B, akriflavin, sefiksim, sefiksim tellurit,fosfomisin, fusidik asit ve rifampisinin etkileri belirlenmiştir. İnhibisyon sistemine LiCl,seftazidim, fosfomisin, nalidiksik asit, polimiksin B ve amfoterisin B, çeşitli aşamalarda dâhiledilmiş ve besiyeri formülleri hazırlanmıştır. Üçüncü aşamada hazırlanan yeni besiyerindeizolatların geri alımı incelenmiştir.Çalışmanın son aşamasında hazırlanan sistem ile ISO 11290-1 yöntemiyle piyasadan toplanan100 örneğin analizinde karşılaştırılmış ve yeni sistem ile daha çok sayıda pozitif sonuç alındığıbelirlenmiştir. Yeni kurulan sistemle L. monocytogenes gelişimi etkilenmeden ISO 11290-1yönteminden daha fazla refakatçi flora inhibe edilmiş, % 48 daha fazla Listeria spp. ve % 37daha fazla L. monocytogenes belirlenmiştir.Tüm bu veriler ışığında besiyerindeki bakteri gelişim faktörleri arttırılarak ve inhibisyon sistemgeliştirilerek L. monocytogenes gelişimi etkilenmeden daha çok refakatçi floranın inhibeedilebileceği sonucuna varılmıştır.Anahtar Kelimeler: Listeria monocytogenes, PALCAM agar, refakatçi flora,inhibisyon, yeni besiyeri

The objective of this study was to investigate an inhibition of competitive flora grown onPALCAM agar plates without affecting the growth of Listeria monocytogenes during L.monocytogenes analysis. For this purpose, the inhibition system was developed by forming preenrichment,selective enrichment and selective solid media. This study was carried out in foursteps.In the first step of the study, naturally contaminated food samples of various types wereanalyzed for L. monocytogenes according to ISO 11290-1 and 107 microorganisms grown onPALCAM agar plate were isolated. A total of 66 microorganisms which were able to grow atlast step of the analysis were selected and used in this study for identification. Of the 66 isolates,14 were L. monocytogenes, 27 were Listeria spp., 11 were Bacillus spp., 6 were Enterococcusfaecalis, 3 were Staphylococcus spp., 4 were yeasts and one was unidentified Gram positive rodbacterium.In the second step of the study, in order to investigate the inhibitory effects of LiCl, ceftazidime,moxalactam, amphotericin B, nalidixic acid, polymyxin B, acriflavine, cefixim, cefixim tellurite,fosfomycin, fusidic acid and rifampisin, the components of selective medias in the inhibitionsystem were modified by adding LiCl, ceftazidime, fosfomycin, nalidixic acid, polymyxin Band amphotericin B at different stages of the analysis, and culture media formulations wereprepared. In the third step of the study, the recovery of isolates from the prepared new mediumwas investigated.In the forth step of the study, the inhibition system formed by using new formulated culturemedia were compared with ISO 11290-1 method by analyzing 100 various food samplesobtained from local markets. The results showed that the new inhibition system inhibited morecompetitive flora without affecting the growth of Listeria monocytogenes during L.monocytogenes analysis than ISO 11290-1 method by detecting 48% more Listeria spp. and37% more L. monocytogenes.In conclusion, more competitive flora without affecting the growth of Listeria monocytogenesduring L. monocytogenes analysis could be inhibited by altering bacterium growth factors andimproving inhibition system in the media.Key Words: Listeria monocytogenes, PALCAM agar, competitive flora, inhibition,new medium