Akvaryum bitkisi Rotala macrandra`nın in vitro koşullarda hızlı çoğaltımı ve gen aktarımı

Abstract

Rotala macrandra Türkiye'de akvaryum bitkisi olarak kullanılan ve genellikle yurt dışından değişik şartlarda getirilen bir su bitkisidir. Bu çalışmada R. macrandra bitkisinin uç, 1'inci koltukaltı ve 2'inci koltukaltı meristemi ile yaprak, 1'inci ve 2'inci boğum arası, eksplantlarından değişik oran ve kombinasyonlarda sitokinin ve oksin içeren agar ve gelrit ile katılaştıran ortamlarda ayrıca sıvı MS besi ortamında sürgün rejenerasyonu sağlanmıştır. Yapılan çoğaltım çalışmasında en fazla sürgün rejenerasyonu (27.33 adet) 1'inci boğum arası eksplantında 0.25mg/l BAP-0.50 mg/l NAA içeren MS besi ortamda elde edilmiştir. Buna karşı sıvı kültürde ise 0.25 mg/l BAP-0.50 mg/l NAA ve 0.50 mg/l BAP-0.50 mg/l NAA içeren MS ortamında birer eksplant üzerinde sürgün rejenerasyonu gözlenmiştir. Daha sonra yaprak ve 1'inci boğum arası eksplantlarıyla Agrobacterium tumefaciens GV2260 P35 GUS-INT ve LBA 4404pRGGbar hatları kullanılarak gen aktarım çalışması yapılmıştır. Her iki hatta da değişik oranda GUS pozitif transgenik aday bitkiler elde edilmiştir. Elde edilen tüm rejenere olmuş ve transgenik aday bitkileri akvaryum ortamına adapte edilmiştir.

Rotala macranda is widely used as aquarium plant in Turkey and is generally brought from abroad through various means. This study reports in vitro regeneration of R. macranda using leaf, first internode, 2nd internode, shoot meristem,1st node and 2nd node on agar and gelrite solidified or liquid MS medium containing variants of cytokinins and auxins. Maximum shoot regeneration (27.33) was recorded on agar solidified MS medium containing 0.25 mg/l BAP-0.50 mg/l NAA. Contrarily, shoot regeneration in liquid culture was recorded on two explants only on MS medium containing 0,25 mg/l BAP - 0,50 mg/l NAA and 0,50 mg/l BAP - 0,50mg/l NAA. Genetic transformation was carried out with GV2260 P35 GUS-INT and LBA 4404 pRGGbar strains of Agrobacterium tumefaciens. The results showed variable percentage of GUS positive transgenic plants from both bacterial strains. All regenerated and putative transgenic plants were acclimatized to external conditions and transferred to the aquariums.