Enzimatik peptid sentezlerinin incelenmesi

Abstract

ÖZET Doğal peptidlerin tıbbi ve farmakolojik bakımdan antibiyotik, hormon, zehir gibi biyolojik aktif özel likleri sebebiyle son yıllarda peptidlerin çeşitli yol larla sentezlerine olan ilgi artarak devam etmektedir. Dolayısıyla peptidlerin aktivitelerini kaybetmeden ı- lımlı reaksiyon şartlarında ekonomik olarak sentezine imkan sağlayan enzimatik peptid sentezleri geniş ve yoğun bir çalışma alanı bulmuştur. Bizde serbest trip sin enzimi katalizatörlügünde korunmamış amino asit ler arasındaki peptid sentezlerini gerçekleştirerek bu, alandaki çalışmalara katkıda bulunmayı amaçladık. Çalışmamızda homojen ve bifazik reaksiyon sistem lerinde glisin amino asidi ile prolin, tirozin, his- tidin ve triptofan amino asitleri arasında tripsin enzimi katalizatörlügünde peptid sentezleri denen miştir. Bu reaksiyonlarda çözücü ve reaksiyon ortamı olarak kullanılan izo amilalkol, izo propanol, etil metil keton, n-benzol ve izo oktan' in peptidlerin sentezine etkilerini araştırdık. Çözücülerdeki kısmi polaritenin peptid sentezini bir dereceye kadar art tırdığını bulduk. Ayrıca reaksiyon ortamındaki sumiktarının peptid oluşumu üzerine etkisini inceledik. Bunun için %5, %10, %15, %20 fosfat tamponu (0.1 M, pH:8) içeren izo amilalkol, izo propanol ve etil me til keton çözücülü reaksiyonlar gerçekleştirildi. En yüksek peptid verimi %10-15 tampon içeren izo amilal- kollü reaksiyon karışımlarında gerçekleşti. Tamponla doygun reaksiyon karışımlarının inkübasyondan sonraki analiz sonuçlarına göre n-benzollü ve izo oktanlı ka rışımlarda ürüne rastlanmadı. Diğerlerinde peptidler değişik oranlarda sentezlendi. Reaksiyon ürünlerinin karakter i zasy onunda kağıt, ince tabaka ve gaz kromatograf isi yöntemleri kulla nılmıştır.

II SUMMARY Owing to the active biologic characteristics of natural peptides, such as poison, hormone, antibiotic in terms of medicine and pharmacology, the interest for the synthesis of peptides in various ways has gradually been on the increase for the last couple of years. That's the reason why enzymatic peptide synthe sis, Which make it possible to synthesize peptides e- conomically without making them lose their activity in moderate reaction conditions, have found quite a dense area of operation. We make it our goal to contribute tothe studies made so far in this area by realising the peptide synthe sis between unprotected amino acids in free trypsin catalyzer. In our experiment, we tried, in homogen and bi- phasic reaction systems, peptide synthesis in the catalyzer of trypsin enzyme among prolin, tyrosin, histidin, tryptophan and glycin amino acids. Isoamyl alcohol, iso propanol, ethylmethyl keton, n-benzol an iso octan, which are used as the solvent and the reac tion compost, have been observed in terms of their ef-fects on peptide synthesis. It was found out that the partial polarity in solvents increased the peptide synthesis to some degree. Moreover, the amount of wa ter in the reaction compost was observed in terms of its effects peptide production. To attain this result, the reactions with iso amylalcohol, iso propanol and ethylmethylketon solvents which 5%, 10%, 15% and 20% of phosphate buffer, were realised. The highest pep tide production took place in reaction mixtures which had 10-15% buffer. According to the results of analysis of mixtures of buffer reactions after the incubation, no product was found in the mixtures of n-bensol and iso octan. In others, the peptides were synthesized in various proportions. Paper, Thin-Layer and Gas Chromatography have been used, for characterization of products reaction.