SE-600 dikey dilim jel elektroforezinde proteinlerin izoelektrik odaklanması

Abstract

ÖZET Biz bu çalışmada elektroforez tekniklerinden biri olan izoelektrik odaklama tekniği yardımıyla metanolde ve glukozda büyütülmüş Hansanııla polymorpha nın glukozda büyütülmüş Saccharomyces cerevisid mn, ticari bira mayasının, mantar ve ayva'nın proteinlerinin izoelektrik odaklamayla ayırmaya çalıştık. Burada öncelikle bitkisel örnek olarak kullanılan mantar, ve ayva'n ın proteinleri asetonda çöktürme tekniği ile çöktürüldü. Diğer taraftan çalışma ekibimiz tarafından %1'lik maya ekstraktı, %2'lik pepton ve karbon kaynağı olarak %1'lik metanol yada %1'lik glukoz kullanılarak büyütülmüş Hamamda polymorpha ve Saccharomyces cerevisia mayalarının proteinleri kumla parçalama tekniği ile elde edildi. Ticari bira mayasnıda sitoliz yöntemiyle parçalanarak çöktürüldü. Bütün bu örneklerde ki toplam protein tayini Lowry metoduna göre yapıldı. Saflandırılan örnekler ve seçilen standart proteinler pH aralığı 3.5-10 olan amfolit kullanılarak hazırlanan poliakrilamid jele uygulandı ve 200 voltta izoelektrik odaklamaya tabi tutulmak suretiyle proteinlerin izoelektrik noktalarına ayrılması sağlandı. Elde edilen jeller Coomassie Brillant Blue R-250 ile boyandı. Standart proteinler olarak pepsin, lipaz, tripsin, sığır senim albumini, jelatin, kazein kullanıldı. Yapılan izoelektrik odaklama sonucunda örnek proteinlerin pl değerleri; standart proteinlerin Rf değerleri ile pl değerleri arasında çizilen standart grafik yardımıyla belirlendi.

SUMMARY In this study, isoelectric focusing which is one of the electrophoresis techniques was used to separate total proteins of industrial yeast strain, mushroom, quince, methanol-grown Hansanula polymorpha and glucose-grown Saccharomyces cerevisiae. Proteins of mushroom and quince were isolated with acetone-precipitating technique, on the other hand Hamamda polymorpha and Saccharomyces cerevisiae were grown on YPM (% 2 yeast extract, % 2 peptone, % 1 methanol) and YPD (% 1 yeast extract, % 2peptone, % 1 glucose) respectively. Total proteins of these yeast were isolated with cell-disturbing technique with sand. However, proteins of industrial yeast strain were isolated with the cytolysis technique. Proteins from all the samples were determined with the Lowry methode. Samples and standart proteins were run on polyacrilamide gel prepared with ampholide with the range of pH 3.5-10. Samples were separated at 200 volt »according to their isoelectric points. Gels were stained with Coomassie Brillant Blue R-250. Pepsin, lipase, trypsin, bovine serum albumine, gelatine.casein were used as standarts. According to Rf and pi values of standarts a referance graphic were drawn and pi values of proteins within the samples were calculated according to the referance graphic.