İnsan serumundan paraoksonaz-1 ve insan trombositlerinden siklooksigenaz-1 enzimlerinin saflaştırılması, bazı ilaçların bu enzimlerin aktiviteleri üzerine etkilerinin incelenmesi
- Global styles
- Apa
- Bibtex
- Chicago Fullnote
- Help
Abstract
Paraoksonaz 1 (PON-1, E.C.3.1.8.1) enzimi insan serumundan amonyum sülfat çöktürmesi, DEAE-Sephadex A 50 anyon değişim kromatografisi ve Sephadex G-200 jel filtrasyon kromatografisi teknikleri kullanılarak %44,8 verimle yaklaşık 257 kat saflaştırılmıştır. Siklooksigenaz-1 (COX-1, EC 1.14.99.1) enziminin ise insan trombositlerinden Sepharose-4B- 1,6-diaminohekzan afinite kromatografisi kullanılarak saflaştırılması başarılmıştır. PON-1 enziminin molekül kütlesi 42,5 kDa; COX-1 enziminin molekül kütlesi 71,5 kDa olarak belirlenmiştir. Saflaştırılan PON-1 enzimi üzerine in vitro inhibisyon etkisi gösteren netilmisin sülfat, linkomisin hidroklorür, streptomisin sülfat, oksitetrasiklin hidroklorür, penisilin G potasyum kristalize, klindamisin fosfat, akarboz, pioglitazon hidroklorür ve metotreksat ilaçları için IC50 değerleri ve Ki sabitleri hesaplanarak inhibisyon tipleri belirlenmiştir. Saflaştırılan COX-1 enzimi üzerine in vitro inhibisyon etkisi gösteren metotreksat, metilprednisolon sodyum süksinat ve azatioprin ilaçları için IC50 değerleri belirlenmiştir. EIA (Enzim immunoanaliz) yöntemi kullanılarak aynı ilaçların COX-1 (koyun) enzimi üzerindeki in vitro inhibisyon etkilerine bakılmıştır ve saflaştırılan COX-1 enzimi ile benzer sonuçlar verdiği bulunmuştur. Paraoxonase 1 (PON-1, EC 3.1.8.1) enzyme was purified from human serum using the ammonium sulfate precipitation, DEAE-Sephadex A 50 anion exchange chromatography and Sephadex G-200 gel filtration chromatography techniques with 44.8% yield approximately 257-fold. Cyclooxygenase-1 (COX-1, EC 1.14.99.1) enzyme was purified from human platelets using Sepharose-4B-1.6-diaminohekzan affinity chromatography. PON-1 enzyme's molecular mass of approximately 42.5 kDa, COX-1 enzyme?s molecular mass of approximately 71.5 kDa was determined. In addition, effects of some drugs on human serum PON-1 enzyme activity and human platelet COX-1 enzyme activity were investigated. IC50 values and Ki values were calculated for the drugs netilmicin sulfate, lincomycin hydrochloride, streptomycin sulfate, oxytetracycline hydrochloride, penicillin G potassium crystalline, clindamycin phosphate, acarbose, pioglitazone hydrochloride and methotrexate. IC50 values of purified COX-1 enzyme was calculated for the drugs methotrexate, azathioprine and methylprednisolone sodium succinate. Using the same drugs, the in vitro inhibition effects on COX-1 (ovine) enzyme were investigated with EIA (enzyme immunoassay analysis) method. Similar results were obtained with the purified COX-1 enzyme.
Collections