Tavuk karaciğerinden sorbitol dehidrogenaz enziminin saflaştırılması ve bazı ağır metallerin enzim aktivitesi üzerine etkilerinin incelenmesi

Abstract

Tavuk karaciğerinden sorbitol dehidrogenaz [L-İditol: NAD+ oksidoredüktaz, EC 1.1.1.14] saflaştırıldı. Saflaştırma; homojenatın hazırlanması, amonyum sülfat çöktürmesi, DEAE-Sephadex iyon değişim kromatografisi ve jel filtrasyon kromatografisi metotları ile gerçekleştirildi. Saflaştırma işlemi %3,65 verimle ve 266,95 kat olarak gerçekleştirildi. SDS-PAGE yöntemi ile tavuk karaciğeri SDH enziminin alt birim molekül kütlesi 41,4 kDa olarak hesaplanırken aktif formunun mol kütlesi ise jel filtrasyon kromatografisi yöntemi ile 169 kDa olarak hesaplandı. Ayrıca tavuk karaciğeri SDH enziminin optimum pH ve optimum sıcaklık değerleri sırası ile 9,0 ve 50OC olarak bulundu. Bu çalışmalarının yanısıra tavuk karaciğeri SDH enzim aktivitesi üzerine Pb+2,Cd+2, Ni+2, Zn+2, Ag+ ve Hg+2 ağır metal iyonlarının inhibisyon etkileri araştırıldı. Pb+2, Cd+2, Ni+2, Zn+2, Ag+ ve Hg+2 için IC50 değerleri ve Zn+2,Hg+2 ve Pb+2 için Ki sabitleri belirlendi.

Sorbitol dehydrogenase [L-Iditol: NAD+ oksidoreductase, EC 1.1.1.14] was purified from chicken liver. Purification was performed by methods of preparation of homogenates, ammonium sulphate precipitation, DEAE-Sephadex ion-exchange chromatography and gel filtration chromatography. The purification was performed with the yield of 3.65% and 266.95 fold. By the method of SDS-PAGE chicken liver SDH enzyme?s subunit molecular weight was calculated as 41.4 kDa, SDH enzyme?s active form molecular weight was calculated as 169 kDa via gel filtration chromatography. Besides, optimal pH and optimal tempreature of the enzyme was observed as 9.0 and 50?C respectively. In addition to these studies, the effects of inhibition of heavy metal ions (Pb2+,Cd2+, Ni2+, Zn2+, Ag+ ve Hg2+) on chicken liver SDH enzyme activity were investigated. For Pb2+, Cd2+, Ni2+, Zn2+, Ag+ and Hg2+ IC50 values were calculated and for Zn2+,Hg2+ and Pb2+ metals Ki constants were determined from Lineweaver Burk graphs.