Aeribacillus pallidus (P26) bakterisinden peroksidaz enziminin saflaştırılması ve kinetiğinin araştırılması

Abstract

Peroksidaz (POD; EC 1.11.1.7), akseptör olarak rol yapan hidrojen peroksitin ve hidrojen atomlarının donörü olarak görev alan, başka bir bileşiğin de bulunduğu bir reaksiyonu katalize eden bir oksidoredüktazdır. Bu çalışmada peroksidaz enzimi (POD), Erzurum-Pasinler kaplıcasından izole edilen termofilik Aerobacillus pallidus'dan (P26) (Gen bank no:EU935591) ekstraselüler olarak üretilmiş, amonyum sülfat çöktürmesi, CM-Sephadeks iyon değişim kromatografisi ve Sephakril S200 jel filtrasyon kromotografisi yöntemleri ile saflaştırılmıştır. Karakterizasyon çalışmalarında 4-metil katekol, H?O?, ABTS, pirogallol substrat çiftleri kullanılarak her bir substrat için ayrı ayrı optimum pH ve sıcaklık değerleri sırasıyla 7.0, 60°C belirlenmiştir. Bu çalışmada en iyi aktivite veren pirogallol substratı kullanılarak stabilite pH ve sıcaklık değerleri tespit edilmiştir. Ayrıca her bir substrat için Lineveawer-Burk grafiklerinden yaralanılarak Km ve Vmax değerleri ayrı ayrı hesaplanmıştır. Bunun yanında çalışmalarımızda peroksidaz enzimi aktivitesi üzerine etki eden bazı metal iyonları incelenmiştir. Enzimin molekül kütlesi 31 kDa olarak bulunmuştur. Bu işlemde ilgili enziminin bazı tekstil boyalarının atık sularda giderilmesi işlemini nasıl etkilediği incelenmiştir. Elde edilen bulgulardan saflaştırılan ve karakterize edilen peroksidaz enziminin katalaz-peroksidaz sınıfına ait olduğu tespit edilmiştir.

Peroxidase (POD, EC 1.11.1.7), which role as acceptor of hydrogen peroxide and hydrogen atoms acts as a donor. which catalyzes a reaction of another compound, including is an oxidoreductase. In this study, enzyme of peroxidase was produced extracellular from thermophilic Aerobacillus pallidus (P26) and isolated from the Erzurum-pasinler spring (Gen Bank NO: EU935591) and purified of ammonium sulphate, sephacril S200 gel in filtration chromatography, CM-sephadex ion changing chromatography and precipitation. In characterization studies, 4-metil katekol, H2O2, ABTS, pyrogallol, substrate pairs were used separate optimum PH and temperature values were determined 7 and 60°C respectively. For each substrate, Km and Vmax values were calculated from Lineweaver-Burk graphs. For each substrate, effects of some metal ions on peroxidase activity was examined. Molecular mass of the enzyme was found as 31 kDa by using gel filtration. In this process, how rationed enzyme effected the process of removal of textile stains in waste water is examined. In addition to this, peroxidase enzyme found belonged to the class of catalase-peroxidase.