İnsan seruloplazmininin saflaştırılması ve bazı kinetik özelliklerinin incelenmesi

Abstract

VI ÖZET Cp'nin ferrooksidaz aktivitesi ile demir homeostazisindeki yeri yanında, antioksidan etki ile konak savunmasında önemli rolü vardır. Ancak yapısındaki prooksidan bakırın etkisiyle LDL oksidasyonu aracılı ateroskleroz oluşumunda da rol oynadığı bildirilmektedir. Cp'nin ferroksidaz aktivitesi, metal iyonu aracılı LDL oksidasyonunu inhibe ederek ateroskleroz için koruyucu bir faktör olup, N-nitrosomorfolin Cp'nin oksidaz aktivitesini inhibe ederek ateroskleroz gelişimine katkıda bulunabilir. Bu çalışmanın amacı Cp'i insan plazmasından saf olarak elde ederek, günlük yaşamda zararlı etkisine sıklıkla maruz kaldığımız nitrozaminlerden N- nitrozomorfolin'in Cp aktivitesi üzerine etkilerini incelemektir. Bu çalışmada; seruloplazmin insan plazmasından Sepharose 4B kullanılarak yapılan kolon kromatografisi ile saflaştırıldı. Saflaştırma işlemi sonrası enzim preparatımn saflığı SDS/PAGE elektroforezi ile gösterildi. Semlopla2ininin p-fenilen diamin dihidroklorit substratı için optimum pH, Km ve Vmax değerleri bulundu. N-nitrozomorfolin'in Cp'nin oksidaz aktivitesini inhibe ettiği gözlendi. Sonuç olarak oksidan/antioksidan dengenin sağlanmasında önemli yeri olan Cp'nin koruyucu etkisinin, nitrozarninler gibi zararlı bileşiklerin vücuda alınmasıyla, azalacağı, prooksidan etkisinin ise artacağı söylenebilir.

vn PURIFICATION OF CERULOPLASMİN AND OBSERVATION OF SOME KINETIC PROPERTIES ABSTRACT Cp has a main role in iron homeostasis by its ferroxidase activity and also it's important for human body defence system by its anti-oxidant activity. However it has also been reported mat, Cp has a role in atherosclerotic formation by copper induced LDL oxidation which is found in its structure. Ferroxidase activity of Cp can inhibit metal ion induced LDL oxidation and protect development of aterosclerosis and N-nitrosomorpholine can cause aterosclerosis by inhibiting oxidase activity of Cp. Ceruloplasmin is purified from the human plasma by the use of Sepharose 4B and column chromatography. The purity of the enzyme preparation was shown by SDS/PAGE method after purifying. The optimum pH, Km and Vmax values for p-phenylene diamine dihydrochloride, a substrat of Cp, was obtained. In in vivo conditions N-nitrosomorpholine inhibited ppd oxidase activity of Cp. In this study it's found that N-nitrosomorpholine inhibites the activity of Cp. Cp is a factor that decreases atherosclerosis and LDL oxidation by ferroxidase activity. N-nitrosomorpholine inhibites Cp activity and it can cause atherosclerosis and other free radical mediated pathologies.. Key words: Ceruloplasmin, purification, N-nitrosomorpholine, kinetic, chromatography