Candida türlerinde biyofilm oluşumu ve antifungal duyarlılığa etkisi

Abstract

Candida türleri sağlıklı bireylerde mikrobiyota elemanı olabilen ve uygun koşullarda fırsatçı enfeksiyonlara yol açabilen mantarlardır. Biyofilm oluşturma yeteneği, özellikle biyomateryaller ile ilişkili enfeksiyonlarda önemli bir virülans faktörüdür. Biyofilm varlığında antifungal ilaç etkinliğinin bilinmesi, bu enfeksiyonların tedavisinde önemlidir. Bu çalışmada üriner sistem enfeksiyonu etkeni olan Candida'larda biyofilm yapabilme yeteneğinin, üriner kateteri olan ve olmayan hastalardan izole edilen suşlarda biyofilm özelliğindeki farkın ve biyofilm varlığında antifungal duyarlılıktaki değişimin araştırılması amaçlanmıştır. Çalışmaya Hacettepe Üniversitesi Hastaneleri Klinik Patoloji Laboratuvarı Mikoloji Birimi'nde tanımlanan, üriner kateteri olan ve olmayan 25'er hastanın idrar kültürlerinden elde edilen toplam 50 Candida izolatı alınmıştır. Biyofilm oluştuma yeteneği Kongo Kırmızısı agar ve mikroplakta XTT indirgenmesi yöntemiyle araştırılmıştır. Flukonazol ve amfoterisin B duyarlılıkları, planktonik hücrelerde Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) önerilerine uygun olarak referans mikrodilüsyon; biyofilm varlığında ise XTT indirgenmesi yöntemi ile saptanmıştır. Kongo kırmızısı agar yöntemi ile suşların 12'sinde (%24), XTT indirgenmesi yöntemiyle ise tüm suşlarda biyofilm oluşumu gösterilmiştir. Hastada üriner kateter varlığı ile izolatın biyofilm özelliği arasında ilişki gözlenmemiştir. Tüm suşlar planktonik formda flukonazol ve amfoterisin B'ye duyarlı bulunmuştur. Biyofilm varlığında ise tümü flukonazole dirençli hale gelmiştir. Suşların hiç birinde test edilen en yüksek amfoterisin B dilüsyonu olan 8µg/ml ile %100 inhibisyon sağlanamamıştır. Değerlendirme %80 inhibisyona göre yapıldığında 14'ü (%28) direnç sınır değerinin altında kalmıştır.

Candida species are fungi that may be present in microbiota of healthy individuals and cause opportunistic infections under appropriate conditions. Biofilm forming ability is an important virulence factor especially in biomaterial related infections. It is important to know the activity of antifungal agents in presence of biofilms for treatment of these infections. This study aimed to investigate biofilm forming ability, difference in biofilm traits in strains isolated from patients with and without urinary catheters, and change of antifungal susceptibility in presence of biofilms for Candida that cause urinary infections. The study included a total of 50 isolates isolated from urine cultures of 25 patients each with and without urinary catheters and, identified in Hacettepe University Hospitals Clinical Pathology Laboratory Mycology Division. Biofilm forming ability was tested by Congo Red agar and microplate XTT reduction methods. Susceptibilities against fluconazole and amphotericin B were determined by Clinical and Laboratory Standards Institute reference microdilution method for planctonic cells and XTT reduction assay for biofilms. Biofilm formation was shown for 12 (24%) isolates by Congo Red Agar method and all isolates by XTT reduction method. No relation between urinary catheter presence in patients and biofilm formation in isolates was detected. All strains were susceptible to fluconazole and amphotericin B in planctonic form. However, all isolates became resistant to fluconazole in presence of biofilm. An inhibition of 100% could not be obtained for any of the isolates with 8µg/ml amphotericin B, the highest dilution tested. If evaluated according to 80% inhibition, 14 (28%) were below resistance breakpoint of amphotericin B in presence of biofilm.