1,1,2,2-tetrakis(p-hidroksifenil)etan: İnsan karbonik anhidraz izoenzimleri I ve II, asetilkolinesteraz, bütirilkolinesteraz,glutatyon S-transferaz enzimleri üzerine inhibisyon etkisi ve antioksidan kapasitesinin incelenmesi

Abstract

Bu çalışma kapsamında, bitki ve ağaçların reçine kısmında bulunan 1,1,2,2-Tetrakis(p-hidroksifenil)etan'ın, insan eritrosit karbonik anhidraz izoenzimleri (hCA I ve II), glutatyon S-transferaz (GST), asetilkolinesteraz (AChE), ve bütirilkolinesteraz (BChE) enzimleri üzerine in vitro olarak inhibisyon etkisi araştırıldı. İlk olarak hCA I, II izoenzimleri Sepharose-4B-L-Tirozin afinite kolon kromatografisi tekniği ile sırasıyla %60,5; %48,7 verim ve 273,4; 819,3 kat saflaştırıldı. CA izoenzimlerinin saflığını belirlemek için, sodyumdodesil sülfat-poliakrilamit jel elektroforezi (SDS-PAGE) yapıldı ve her bir izoenzim için tek bant gözlendi. Ayrıca insan eritrositlerinden GST enzimi Glutatyon-agaroz afinite kolon kromatografisi ile%32,4 verimle 123,5 kat saflaştırıldı. Daha sonra 1,1,2,2-Tetrakis(p-hidroksifenil)etan'ın hCA I ve II, GST, AChE, ve BChE enzimlerine karşı IC50 ve Ki değerleri belirlendi. Bu inhibisyon etkileri standart enzim inhibitörleri ile kıyaslandı. Çalışmanın son kısmında 1,1,2,2-Tetrakis(p-hidroksifenil)etan'ın, demir (Fe3+ -Fe2+) indirgeme kapasitesi, kuprik iyonları (Cu2+) indirgeme kapasitesi, FRAP metoduna göre ferrik iyonları (Fe3+) indirgeme kapasitesi, 2,2'-azino-bis (3-etilbenztiyoazolin-6-sülfonik asit) radikal (ABTS.+) giderme, 1,1-difenil -2-pikril-hidrazil serbest radikal (DPPH.) giderme, N,N-dimetil-p-fenilendiamin radikal (DMPD.+) giderme, süperoksit anyon radikali (O2.-) giderme aktiviteleri ile ferrozin ve bipiridil reaktifleriyle ferröz iyonları (Fe2+) şelatlama aktiviteleri ve tiyosiyanat yöntemine göre total antioksidan aktivite çalışmaları antioksidan kapasitesinin belirlenmesi için yapıldı. Sonuçları mukayese etmek için, troloks,α-tokoferol, bütillenmiş hidroksitolüen (BHT) ve bütillenmiş hidroksianisol (BHA) standart antioksidanları kullanıldı.

In this study the in vitro inhibitory effect of 1,1,2,2-Tetrakis(p-hydroxyphenly)ethane, found in resins of plants and trees, on erythrocyte carbonic anhydrase isoenzymes I and II,glutathione S-transferase (GST)acetylcholinesterase (AChE),and butyrylcholinesterase (BChE) were investigated. Firstly, hCA I, and II were purified by Sepharose-4B-L-Tirozin affinity column chromatography with a yield of 60.5%; 48.7% and 273.4; 819.3-fold purification of each isoenzyme, respectively. For determination of the CA isoenzyme purity, sodiumdodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) was applied and single band was observed for each isoenzyme. Also, glutathione S-transferase was purified by glutathione-agarose column chromatography with a yield % 32.4 and 123.5 purification fold. Then, of IC50 and Kİ values of Tetrakis ethane were determined against the metabolic enzymes including hCA I, hCA II, GST, AChE and BChE.These inhibition effects were compared to standard enzyme inhibitors. Continuation of this study, for evaluating antioxidant and radical scavenging capacity 1,1,2,2-Tetrakis(p-hydroxyphenly)ethane, Fe3+-Fe2+ reducing capacity, cupric ion (Cu2+) reduction capacity by Cuprac method, reducing capacity by FRAP method, ABTS radical clarifing (ABTS•+), DPPH free radical clarifing (DPPH·) and DMPD radical clarifing (DMPD•+) activities, superoxide anion radical clarifing (O2•-),metal chelating reagents, bipyridyl chelating reagents andtotal antioxidant were performed separately and during study, BHT, BHA, α-tocopherol and trolox were used as the reference antioxidant compound. Comparisons were applied with the four standard substances.