Trichoderma reesei QM9414 selülaz genlerinin klonlanma aşamasına getirilmesi

Abstract

Ö Z E T Buradaki çalışma, Trichoderma reesei QM9414'ün selülaz genlerinin klonlanması için gerekli olan ön çalışmaları içermektedir. Küf moleküler genetiğinin bu alanı önemlidir. Çünkü, kimyasal maddelerin ve sıvı yakacakların, selülozdan tekrar eldesi, dünyaca önem kazanmaktadır. Ayrıca, klonlama teknikleri, T.reesei'nin gen fonksiyon ve regülasyonu üzerine ışık tutacak niteliktedir. Selülaz enzimlerini üreten küfler için ilk defa bir tarama yöntemi geliştirildi. Bu metod, kongo kırmızısını, indikatör olarak gerekli kılmaktadır. Bu metod, çabuk, tekrarlanabilir ve oldukça hassastır, Selülaz üreten küfler, iki gün gibi kısa bir süre içinde bu yöntemle saptanabilir. Bu metod dinitrosalisiklic asid metoduyla doğrulandı. Bu iki metod birlikte kullanılarak, N.crassa, T.reesei, A.niger'in selülaz ürettikleri doğrulandı. A.ochraceus, T.roseum, T.harzianum, P.italicum'un selülaz ürettikleri bu metodla ilk defa gösterildi, T.reesei'nin DNA1sı saflaştırılarak, sekiz değişik restriksiyon endonukleazı ile kesilerek incelendi, Bu yöntemle saflaştırılmış DNA'nın moleküler ağırlığı elektron mikroskopu ile saptandı ve 100 kb civarında olduğu bulundu. T.reesei'nin hücreler arası proteinleri poliakrilamid gel elektroforezi kullanarak incelendi.

S U M M A R Y The work reported here in covers preliminary work on cloning cellulase genes of Trichoderma reesei QM9414. This area of fungal molecular genetics is of significance, in that, There seems to be world-wide interest in exploiting renewable resources of biomass as a source of chemicals and liquid fuels, Cloning also provides a technique for further funda- mental research in T. reesei on gene function and regulation. A method for screening cellulolytic fungi has been success- fully developed which involves the use of Congo red as an indicator to detect cellulolytic activity produced by dif- ferent fungi, This methpd is very efficient, rapid, repro- ducible, and also sensitive, Cellulolytic fungi can be dis- tinguished within two days with this method. The signifi- cance of Congo red method has also been confirmed with che dinitrosalicyclic acid reagent method. The ability of N.crassa, T. reesei, and A.niger to degrade cellulose has been qualitatively and quantitatively confirmed, and also for the first time, it has been shown that A.ochraceus, P.italicum, T.harzianum, and T.roseum are true cellulolytic organisms. The DNA of T.reesei was isolated with a very efficient method, and was cleaved with eight different restriction endo- nucleases, The size of the isolated DNA was measured with electron microscope and found to be approximately 100 kb. The extracellular poteins of T,reesei were investigated by using polyacrylamide gel electrophbresis.