Echerichia Coli`de sıklık adenozin monofosfat proteininin amino bölgesinin üretilmesi

Abstract

ÖZET Bu araştırmada Escherichia coli'nin siklik adenozin monofosfat (cAMP) proteini (CRP)'nin N-uç bölgesinin üretilmesine çalışılmıştır. pRE2, pREcrpWT, pREcrp91, pREacrp222 plazmidleri E. coli CA8445pRK248 konak susuna aktarılmıştır. Daha sonra bu suş içerisindeki plazmidlerin in vivo karbohidrat fermentasyon özelliklerine bakılmıştır. CA8445pRK248/pREacrp222 CRP'nin N- uç bölgesini üretip üretmediği Sodyum Dodesil Sülfat- Poliakrilamid Jel Elektroforezi (SDS-PAGE) ile araştırılmıştır. Elektroforez sonucunda keskin ve belirgin bantlar oluşması beklenirken yeni bir banta rastlanılmamıştır. Bunun sebebi, ya üretilen proteinin kararsız yapısından dolayı parçalanması yada bu kararsızlıktan dolayı sadece görülemeyecek kadar az bir miktarın sağlam kalması olabilir. Bu çalışma, aCRP'nin gerçekten üretilip üretilmediğini anlamak için in vivo çalışmaların yeterli olmadığını ve bu nedenle bu çalışmaların in vitro ve radyoaktif madde kullanarak yapılan çalışmalarla desteklenmesi gerektiğini göstermektedir. Anahtar kelimeler: CRP, E. coli, cAMP V

SUMMARY THE EXPRESSION OF THE N-TERMINAL DOMAIN OF CYCLIC ADENOZIN MONOPHOSPHATE PROTEIN OF ESCHERICHIA COLI In this study, the expression of the N-terminal domain of cyclic adenozin monophf osphate protein (CRP) of E_. coli has been searched. pRE2, pREcrpWT, pREcrp91, pREacrp222 plasmids were transformed into E_. coli CA8445pRK248 strain. Then, the fermentation characteristics of these plasmids in E. coli CA8445pRK248 were scored. The expression of N-terminal domain of CRP from CA8445pRK248/pRE<xçr_E222 was searched by SDS-PAGE. Although it has been expected to detect a new and sharp band, no band was detected with the aid of used method. It is because of either complete degredation of novel protein which is unstable or partial degredation which leaves the unobservable amount of novel protein in solution. This study shows that in vivo studies are not yet sufficient enough to understand whether aCRP has been expressed, so this studies should be supported with in vitro studies and other studies which utilize a radioactive label. Key Words: CRP, E. coli, cAMP VI