Bitki dokularından (Petroselinum crispum yapraklarından) dehidroaskorbat redüktaz enziminin saflaştırılması ve spektral özellikleri

Abstract

ii ÖZET Dehidroaskorbat redüktaz enzimi, maydanoz yapraklarından saf laştırıldı. Saflaştırma kademelerinde % 40 - % 75 amon yum sülfat kesitlemesi, sephadex G-100 kromatograf isi, CM- sephadex iyon değiştirici kromatograf isi ile sepharose-GSH ve Hexyl-GSH sepharose afinite kromatograf isi uygulandı. Bu aşamaların sonunda enzim 976.56 kez saf laştırıldı. Enzim, SDS'lı jel elektroforezinde incelendiğinde, % 100 saf olmadığı, ancak diğer proteinlerden önemli miktarda uzak laştırıldığı gözlendi. Molekül ağırlığı 25.000 dalton olarak saptanan enzimin bir molünün, altı sülfhidril grubu içerdiği bulundu. Enzimin bazı metal iyonları ile inhibisyonu ve aktivasyonu incelendi. Lityum klorürün enzimi aktive ettiği, ferrik ve kromun (+3) ise enzimi inhibe ettiği gözlendi.

İÜ SUMMARY Dehydroascorbate reductase has been purified from Vztn.04eJLin.um ciiipum leaves. The purification steps included 40 % - 75 % ammonium sulphate, sephadex G-100 chromatography, CM-sephadex ion exchange chromatography and sepharose-GSH, hexyl-GSH sep- harose affinity chromatography. At the end of these steps the enzyme has been purified 976.56 fold. SDS-gel electrophoresis showed that the enzyme was not 100 % pure, but have been separated from a number of foreign pro teins. The molecular weight of the enzyme have been determined aş 25.000 dalton. It has been found that one mole of enzyme contained six sulphydryl groups. Some metal ion inhibition and activation of the enzyme has been investigated. Lithium chloride has been found to be activator, ferric and chromium (+3) ions have been found to be inhibitory on enzyme activity.