Soya fasulyesi (Glysine max) üreazının saflaştırılması ve bazı biyokimyasal özelliklerinin incelenmesi

Abstract

11 ÖZET Ureaz (üre amidohidrolaz E.C. 3.5.1.5.) üreyi NH, ve CO'e hidroliz eder. Pekçok canlıdan elde edilen bu enzimin, son yıllarda vücut sı vılarında üre varlığının saptanmasında kullanılan elektrotların yapımında ve hemodiyaliz sonrası diyaliz çözeltisinin re j enerasyonunda tıbbi amaçla kullanılmaktadır. Protein içeriği açısından son derece zengin olan ve ülkemizde de yetişen soya fasulyesinin (GZy&inz max) yüksek oranda üreaz enzimi içediği bilinmektedir. Ekonomik önemi büyük olan soya fasulyesi üreazının biokimyasal özellikleri açısından incelenerek, saflaştırılması bu tez çalışmasının ana amacını teşkil etmektedir. Yapılan laboratuvar çalışmaları sonucunda soya fasulyesi üreazı için optimum pH: 6.4, optimum enzim-substrat inkübasyon ve çözünme sıcaklığı 37`C, uygun substrat derişimi 150 JJmol/5ml, çözünme süresi 2 saat olarak belirlendi. Amonyum sülf atlama, diyaliz ve Sephadex G-200 jel ele mesi ile üreaz enzimi 3.65 kez daha saf elde edildi. Saf enzimin Hg, ++ ++ ++ Cu, Fe ve Zn gibi metal iyonları tarafından hızla inhibe + + ++ ++ ++.. olduğu gözlendi. Ayrıca Na, K, Ca, Mg ve Li gibi bir ve iki değerlikli katyonların da enzim üzerinde inhibitor yada reaktivatör rolü oynadığı belirlendi. % 2'lik Arabik gum enzim inhibisyonunda ko- -2 ruyucu rol oynarken 1x10 M derişimindeki Sistein amino asiti enzi min yüksek oranda aktivasyonuna neden oldu. Kısmen saflaştırılan soya fasulyesi üreazının +4`C'de buzdolabında 7 gün süre ile saklandığında çok az bir aktivite kaybına uğradığı gözlendi.

Ill SUMMARY Urease (urea amidohydrolase E.C. 3.5.1.5) hydrolases urea into NH, and CO». This enzyme can be obtained from many organisms and is used as electrodes for the determination of urea in body fluids. Also recently it is used for the regeneration of dialysis solution after hemodialysis. Soybean, (GtyAİnz max.) which has high and rich protein content, is grown in our country. It is also known that it has high content of urease enzyme. Soybean urease is economically important. The main aim of this research is the purification of soybean urease and the investigation of its some biochemical properties. After laboratory investigation of the enzyme it was determined that the optimum pH was 6.4, optimum enzyme-substrate incubation and solubility temperature was 37 *C, convenient substrate concentration was ISOjJmol/Sml urea and solubility time was 2 hours. Enzyme was purified by the use of ammonium sulfate precipitation, dialysis and Sephadex G-200 gel filtration and was purified a 3.65 fold. It was obtained... ++ that the pure enzyme was inhibited with some metals such as Hg, Cu, Fe and Zn. In addition, it was shown that some cations such as Na, K, Ca, Mg and Li caused inhibition or reactivation of the enzyme. A 2 % concentration of Arabic gum is a protector of this -2 enzyme and 1x10 M of cysteine amino acid causeshigh activation. It was observed that when the partially pure urease was stored at +4`C, for a week its activity slightly decreased.