Askobik asit oksidasyonu ve DNA hasarı

Abstract

iv ÖZET Oksidatif koşullara maruz kalan MA molekülleri hasara uğrar. MA hasarım neden olan etkenler, oksidasyon sırasında oluşan reaktif oksijen türleridir. Oksidatif koşullar, metabolizma sırasında ya da dışardan alınan çeşitli kimyasalların ve radyasyonun etkisiyle oluşur. Askorbik asitin (C vitamini) oksitlenmesiyle oluşan askorbil radikali, rnoleküler oksijenle tepkimeye girerek, süperoksit gibi çeşitli reaktif oksijen türlerinin oluşumuna neden olur. Bu tez çalışması kapsamında, askorbik asitin oksidasyonu sonucunda oluşan MA hasarı incelenmiştir. Askorbik asitin oksidasyonu için iki farklı yöntem kullanılmıştır. Birinci yöntemde, oksitleyici ajan olarak metal iyonu (Cu2*), ikinci yöntemde ise elektrik akımı kullanılmıştır. Oksidasyon ürünlerinin kırıcı etkisi; virüs (A), plazrnid (pHK 3), insan genomik BNAları ve insan genomuna ait çoğaltılmış MA fragmentleri (p- globin geni) üzerinde test edilmiştir. Kırılma reaksiyonu sonuçları; agaroz j el elektroforezi, Southern blot analizi, polimeraz zincir reaksiyonu ve MA dizi analizi teknikleri ile incelenmiştir.

ABSTRACT damage occur under the oxidative stress. The factors that caused the MA damage are reactive oxygen species and they form together with oxidative reactions. Oxidative stre33 can be formed by metabolic- energy production or effects of chemicals and radiation. The radical form of ascorbic acid (vitamin C) react with molecular oxygen. This reaction causes the formation reactive oxygen species such as superoxide anion. In this work, DHA damage which is formed by oxidation of ascorbic acid has been investigated. Two different methods for the oxidation of ascorbic acid were used. In the first method, ascorbic acid was oxidised with metal ions (Cu2+). In the other., the electrochemical method was used for the production of ascorbyl radical. The effects of oxidative products were tested on virus (A), plasmid <pKK 3), human genomic MAs and amplified DNA fragments of human p- globin gene region. The results of scission reactions were analysed with agarose gel electrophoresis.. Southern blotting, polymerase chain reaction and DNA sequencing techniques.